紫杉醇和吉西他滨对鼻咽癌HNE2细胞系 协同放射增(2)

1.6WesternBlot法测定bcl2、bax的表达分组及每组处理方法同1.5，将四组细胞常规消化后置EP管800r/min离心5min，弃上清，PBS清洗2遍，每管加新鲜配制的裂解液100μl，4℃裂解30min，随后4℃12000r/min离心15min，吸上清，每个样本均分装成5μl及60μl两管，－20℃保存。将5μl/管蛋白加上样buffer沸水煮5min，BCA法测样本蛋白浓度。用15%的SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离样本蛋白，电转移至硝酸纤维素滤膜上，与兔抗人bcl－2及bax多克隆抗体4℃孵育过夜。次日加入辣根过氧化酶标记的二抗，室温孵育1h，ECL显色，X射线片显影。实验重复3遍。

1.7统计学处理所用数据均以均数±标准差表示，结果用SPSS13.0统计软件进行t检验。

2结果

2.1GE及PA的IC50和IC10值MTT实验表明不同浓度梯度的PA及GE作用细胞24h后，细胞抑制率随药物浓度的增加而增加，结果见表1。应用IC50计算软件求出GE的IC50及IC10分别为173.2μg/ml和0.210μg/ml。PA的IC50及IC10分别为2.73μg/ml和0.13μg/ml。以下的实验均选用两种药物的大致IC10浓度0.2μg/ml（GE）和0.1μg/ml（PA）。表1GE及PA对HNE2细胞的生长抑制作用

2.2GE、PA及GE PA对细胞放射敏感性的影响将正常细胞、GE、PA作用后细胞及两者联合作用后细胞分别给予0、2、4、6、8Gy射线照射后多靶单击模型拟所得结果如图1。单纯对照组细胞存活曲线的D0=3.17，Dq＝1.73；GE组的D0=2.99，Dq＝1.52；PA组的D0=2.8，Dq＝1.44；联合用药组的存活曲线与前三组相比明显下移，肩峰变窄，D0=2.37，Dq＝1.07。吉西他滨的增敏比（单纯照射组D0与吉西他滨组D0之比值，以下类推）为1.06，紫杉醇的增敏比为1.13，而两药联合后的增敏比为1.34，明显高于两药分别使用时的增敏比(P