高效液相色谱法测定橘核中橙皮苷的含量(2)

　　2.1.1对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的橙皮苷对照品2.06 mg，用甲醇溶解并定容至10 mL，制成每1 mL含橙皮苷0.206 mg的对照品溶液。

　　2.1.2供试品溶液的制备取经粉碎机粉碎的橘核粉末约1 g，精密称定，用石油醚100 mL索氏提取4.5 h，滤渣挥干石油醚，置圆底烧瓶中，加甲醇20 mL,水浴加热回流1 h，静置冷却至室温，滤过，滤渣再加甲醇20 mL重复提取1次，合并2次滤液，浓缩定容至 10 mL，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

　　2.2色谱条件与系统适用性

　　色谱柱：安谱公司Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相：甲醇-36%(体积分数)乙酸-水(体积比38∶2∶60);流速：1.0 mL·min-1;检测波长：285 nm;柱温：25 ℃。分别精密吸取对照品、供试品溶液各10 μL注入液相色谱仪中，记录色谱图，见图1。

　　2.3线性关系考察

　　精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液 0.5、1、2.5、5、7.5、10 mL，分别置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μL进样。按“2.2”项下色谱条件进行测定，测定峰面积。以峰面积积分值(Y)为纵坐标，橙皮苷对照品进样量(X)为横坐标进行线性回归，得回归方程为：Y=2×106X-14823×104，r=0.999 9。结果表明，橙皮苷在0103～2.060 μg之间线性关系良好。[PSd201;S*2〗A.橙皮苷对照品; B.橘核供试品图1 橘核HPLC图Figure 1HPLC chromatograms

　　2.4精密度试验

　　精密吸取橙皮苷对照品溶液(0.206 mg·mL-1)10 μL，注入液相色谱仪，重复进样6次，测定橙皮苷色谱峰峰面积，RSD为1.82%(n=6)，表明仪器精密度良好。

　　2.5重复性试验

　　取第3批的橘核样品6份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样10 μL，测定橙皮苷峰面积，计算含量，其RSD为2.50%(n=6)，表明该方法重复性良好。

　　2.6稳定性试验

　　取同一份供试品溶液(第3批)，分别在0、3、6、12、18、24 h精密吸取10 μL，注入液相色谱仪，测定橙皮苷峰面积，计算含量，其RSD为1.76%，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

　　2.7回收率试验