成年兔心耳肌细胞的分离标记与自体移植(2)
2013-11-27 01:01
导读:1.2方法 1.2.1自体左心耳心肌组织的取材取成年兔经耳缘静脉注射戊巴比妥钠(30 mg/kg),左侧胸骨旁切口,切断第4肋骨进胸,向上推开胸腺,剪 开心 包,
1.2方法
1.2.1自体左心耳心肌组织的取材取成年兔经耳缘静脉注射戊巴比妥钠(30 mg/kg),左侧胸骨旁切口,切断第4肋骨进胸,向上推开胸腺,剪
开心包,显露并牵引左心耳,用4号丝线结扎左心耳基底部后,剪取左心耳并立即置于预冷(4℃)的普通台式液中. 用盐水纱布覆盖伤口.
1.2.2左心耳心肌细胞的消化分离参照文献[2],在无钙台式液(mol/L: NaCl 140, KCl 5.4, MgCl2 1, 酶糖10, HEPES 5, pH 7.4)中洗去血凝块,用眼科剪将心耳组织剪碎,移入含有1.25 g/L胰酶、0.25 g/L胶原酶的无钙台式液中,37℃消化10 min. 轻柔吹打,自然沉淀后弃上清. 再加入酶消化10 min,轻柔吹打后,吸取上清,移入等体积含100 mL/L新生牛血清的DM