差异基因研究技术及其应用论文(2)
2014-08-09 02:23
导读：3 差异显示PCR方法（differential display PCR,DD-PCR） 利用可以扩增所有哺乳类mRNA的几条5′特定引物和几条3′锚定引物随机组合，将cDNA进行PCR扩增，这样对于相
3 差异显示PCR方法（differential display PCR,DD-PCR）
利用可以扩增所有哺乳类mRNA的几条5′特定引物和几条3′锚定引物随机组合，将cDNA进行PCR扩增，这样对于相同的cDNA，PCR产物的种类多少和分布应该是完全一样的，而对于不同的cDNA则可以找到差异条带，它们所代表的cDNA就有可能与细胞状态的改变或疾病状态相关。
差异显示PCR方法具有快速、所需RNA量少、可同时显示多种生物性状的差异及可以同时获得高表达和低表达的基因等诸多优点；但假阳性率高，可高达70%的假阳性条带［7］；不能反映低拷贝mRNA的差异，对高拷贝基因有偏向性；获得的片段多为300bp左右的3′非编码区，很难判断其功能和意义，只能提供研究线索。
哺乳动物的创伤愈合常需要数周至数月时间，伴有瘢痕形成且机制不明，MRL/MPJ（MRL）鼠具有无瘢痕愈合的能力，Masinde等［8］采用差异显示PCR方法研究了参与MRL/MPJ（MRL）鼠无瘢痕创伤愈合的基因，鉴定了36个与创伤愈合有关的差异表达基因，为无瘢痕创伤愈合的研究提供了靶基因。
4 消减杂交法（SH）
经典的消减杂交法是将实验组mRNA（或cDNA）与对照组cDNA（或mRNA）杂交，去除杂交体和未杂交上的对照组成分（cDNA或mRNA），得到实验组独有的cDNA或mRNA，这些基因即为差异表达基因。为克服传统的消减杂交法的不足，新的消减杂交技术应运而生。
4.1 代表性差异分析技术（RDA） 原理是首先用DpnⅡ或Sau3AI酶切两组双链cDNA，两端接上单链接头R，补平后，用含接头R序列的引物扩增，再用DpnII或Sau3AI去除双链cDNA两端的接头R；只给予实验组双链cDNA两端再接上单链接头J。将实验组与驱动组cDNA杂交，杂交
