探讨RhD阳性血影细胞的制备及应用论文(2)
2014-08-11 01:05
导读：2.3 IgG含量、抗-D抗体含量和回收率 用30 mmol/L PB制备的血影细胞对血浆进行亲和层析得到的制剂中，IgG含量为（4.24±1.53）g/L（n=7），其中单体加二聚体占（
2.3 IgG含量、抗-D抗体含量和回收率
用30 mmol/L PB制备的血影细胞对血浆进行亲和层析得到的制剂中，IgG含量为（4.24±1.53）g/L（n=7），其中单体加二聚体占（99.9±0.25）％（n=7）；抗-D抗体的含量为（3.45±0.31）mg/L（n=7），回收率为（84.65±7.85）％（n=7）；7次重复得到的制剂均不含抗A、抗B血型抗体以及IgA、IgM和血红蛋白。
2.4 分离纯化过程对血影细胞的影响
用30 mmol/L PB制备的血影细胞在2%戊二醛固定后和亲和层析后细胞形态略变小，而经过洗脱液洗脱的血影细胞比固定后的细胞形体稍大，但细胞仍然呈完整圆形，细胞涂片光镜下未观察到细胞膜的碎片。见图1。
3 讨论
本课题组曾用柱层析法从低效价血浆中分离得到含抗-D抗体的IgG[6]，再用经2 ％戊二醛固定的RhD阳性红细胞从IgG中纯化抗-D抗体。
为提高抗-D抗体的回收率，设想直接用RhD阳性红细胞从含抗-D抗体的血浆中分离纯化该抗体。实验发现，戊二醛固定30 min的红细胞与血浆接触后出现血红蛋白溢出现象，延长红细胞固定时间和灭活血浆补体仍不能改善。鉴于RhD抗原仅位于红细胞膜上，参考Litten等[7，8]方法，利用低渗的裂解液将血红蛋白从红细胞中释放出来。结果表明，渗透浓度分别为40、30和20 mmol/L的PB均可使红细胞裂解而释出Hb，成为具有D抗原性的血影细胞。光镜下，用40和30 mmol/L的PB制备的血影细胞呈光滑圆形，未见细胞膜碎片；40
