对苏木素与胰蛋白酶作用的性质研究论(2)
2015-04-11 01:24
导读：3.3 荧光光谱以λex＝280 nm，胰蛋白酶在354 nm附近有很强的荧光峰；而以同样激发波长激发苏木素溶液，在354 nm附近则没有荧光峰，证明苏木素不会产生与胰
3.3 荧光光谱以λex＝280 nm，胰蛋白酶在354 nm附近有很强的荧光峰；而以同样激发波长激发苏木素溶液，在354 nm附近则没有荧光峰，证明苏木素不会产生与胰蛋白酶干扰的荧光。固定胰蛋白酶的量，随着体系中苏木素浓度的增加，胰蛋白酶的内源荧光产生有规律的猝灭，其最大发射波长未发生明显的变化（见图2）。
3.4 荧光猝灭常数及猝灭机理
3.4.1 苏木素对胰蛋白酶的猝灭效应一般情况下，可依据不同温度下的结果区别是动态猝灭，还是静态猝灭。对于动态猝灭，随着温度升高，将增加离子有效碰撞的数目，加剧电子的转移，使荧光物质的猝灭常数随温度的升高而增大。而对于静态猝灭则温度升高将降低复合物的稳定性，使猝灭常数减小。本文以相同的实验条件，分别测定了在20，25℃ 下胰蛋白酶的荧光猝灭光谱，以［F0/F－1］对［C］作Stern－Volmer图见图3。从图3可以看出苏木素在温度低于25℃时猝灭常数随温度的升高而降低，即符合静态猝灭机理。
当猝灭体分子和荧光物质分子之间形成新的复合物而发生静态猝灭时，服从Lineweaver-Burk方程。20，25℃时以（F0－F）－1对［C］－1拟合Lineweaver-Burk方程，由图4可见该双倒数呈现良好的线性关系，再次确定在20，25℃时为静态猝灭。
3.4.2 结合位点数n及结合常数KA的计算设苏木素与胰蛋白酶形成n个结合点位的复合物则有：
Lg［（F0－F）/F］＝lgKA nlg［C］
分别作不同温度下Lg［（F0－F）/F］－lg［C］的双对数拟合，得到不同温度下的KA和n见表1。表1 苏木素与胰蛋白酶的结合常数，结合位点数及相应的相关系数（略）
3.4.3 作用力类型的确定猝灭体与生物大分子之间的相互作用力
