树突状细胞在慢性乙型肝炎中的免疫功能状态(2)

　　2　DC的特性和功能

　　DC具有异质性，有人将其分为髓系和淋巴系两大类，但至今仍无非常明确的分类标准。不同的DC担负着不同的使命。胸腺髓质中的DC参与胸腺中的阴性选择，它呈递自身抗原与MHC的复合物给T细胞，然后使能够识别自身抗原并与之有较高亲合力的T细胞克隆失能。髓系DC对T细胞免疫反应可产生强烈的刺激作用，并可分泌IL12，调节T细胞和NK细胞功能，促进Th0朝Th1方向分化，显著影响Th1和Th2的平衡［4］。DC在外周性免疫耐受中也起重要作用。淋巴系DC倾向于促进Th2分化，并可递呈源自凋亡细胞的肽片段。据此，DC可通过递呈来自体细胞的自身抗原给T细胞而诱导对自身蛋白的耐受。迁移中的髓系DC，包括LC，在遭遇外源抗原后产生活性，移向淋巴器官启动免疫反应［5,6］。DC对B细胞的生长和免疫球蛋白的分泌有重要作用。两者虽同为APC，但DC有较高MHC及共刺激因子的表达并能大量产生IL12；DC通过Fc及多聚凝集素(multilectin)受体中和抗原，B细胞则有抗原特异性免疫球蛋白受体［7］。原始B细胞仅与间质内非郎罕型DC反应，在DC分泌的IL12作用下产生抗体；DC同时调控着B细胞所产生的免疫球蛋白的种类，IL10与TGFβ诱导IgA1的生成，IgA2的表达则严格依赖于B与DC的直接相互作用，这说明DC控制着黏膜的免疫［8］。滤泡型DC直接维持激活B细胞的活力、生长与分化，生发中心含有CD11c DC，它可携带免疫复合物，有较强的刺激B细胞的能力，DC与B细胞间作用方式也遵循双信号原则，即DC上的特异性抗原被BCR接受产生第一信号，DC上CR2L与B细胞上CR结合，这对共刺激因子提供第二信号调控体液免疫［9］。近年来，越来越多的证据表明，由DC激活的细胞免疫特别是CTL介导的免疫反应，在机体抵御恶性肿瘤和传染性疾病中发挥着十分重要的作用，而且最近DC疫苗的临床Ⅰ期、Ⅱ期试验也取得了令人鼓舞的结果，显示出DC疫苗在恶性肿瘤等疾病中的巨大前景［10］。DC是体内最强的抗原呈递细胞，成熟的DC可高表达MHC分子、协同刺激分子和粘附分子从而刺激初始型T细胞诱导初级免疫反应，同时通过分泌IL12活化NK细胞，促进Th1型细胞因子IL2、IFNr的分泌，因此DC被认为是一种很强的天然佐剂诱导细胞毒性T细胞反应，在应用于抗感染和抗肿瘤免疫过程中发挥关键性的作用［11］。目前已知，DC发挥其功能并不是固定的、程序化的，而是随着外界环境信号的不同而变化，影响因素包括：具有抗炎症性质的细胞因子的作用(如IL10、TGFB)、致病原的性质等［12］。已知在麻疹病毒感染时，DC功能下降，不能刺激同种异体T淋巴细胞增殖。Chisari发现HBV转基因小鼠DC功能正常，HBsAg特异性CTL存在，仅功能上处于静息状态，如果将经细胞因子活化的DC回输小鼠则可以打破耐受，发挥抗病毒的CTL反应［13］；相反的，Akbar［14］进行一系列实验证明HBV转基因小鼠DC的MHCⅡ(1a抗原)和CD86的表达及诱导T细胞增殖效率方面远低于正常小鼠。实验用无血清培养基AIMV体外培养慢性乙肝患者DC，并比较了慢性乙肝患者与正常人DC的差别：在细胞表型上，患者DC的CD80表达显著低于正常人DC，而HLA分子及其他协同刺缴分子无明显差别；在功能上，乙肝患者的DC可刺激T细胞增殖，但其增殖能力低于正常人DC。我们知道刺激T细胞反应需要协同刺激分子CD28B7提供第二信号系统，如果缺乏将导致T细胞无能。B7家族包含两种B71(CD80)和B72(CD86)分子，到目前为止，这两种信号的具体功能分工仍不十分明确，有实验表明，CD80信号促进Th1细胞的分化，诱导细胞免疫的发生，CD80基因敲除的小鼠有正常的免疫球蛋白超家族库，如果缺乏CD86分子体液免疫将受到破坏。实验发现慢性乙肝患者DC的CD80表达低于正常人，可能与抑制了T细胞活化有关，同时可以解释MLR实验中乙肝患者DC反应下降的情况。慢性乙肝患者DC功能降低，即不能有效的将抗原呈递给T细胞诱导特异的细胞毒反应，因此不能有效的杀伤感染细胞和抑制病毒增殖，导致乙肝慢性感染状态［15］。DC广泛的分布于全身各器官，可以从外周摄取抗原，将其处理后呈递给T细胞，诱导免疫反应，因此DC是免疫反应的启动者。Chisari［16］实验中发现HBV转基因小鼠不能对HBsAg产生免疫反应，但是当将DC回输给小鼠时，可以产生正常数量的针对HBsAg的CTL，研究表明HBV转基因小鼠对HBsAg的耐受是由于T细胞无能或T细胞忽略形成的而不是由于T细胞的缺失，DC给T细胞提供了活化必需的信号，因此产生了特异的CTL。我们将DC事先以HBV C区CTL表位多肽刺激，再将刺激后的DC与自身淋巴细胞孵育，诱导CTL的产生，实验结果显示诱导后的T细胞均可分泌较高水平的细胞因子，与正常志愿者无明显差别，而与其记忆性T细胞比较分泌细胞因子的水平有显著性提高。实验揭示慢性乙肝患者外周血经细胞因子活化的DC可以诱导特异的抗HBV的T细胞反应［17］。DC作为专职抗原呈递细胞在用于抗病毒免疫治疗的方面具有很大潜能，乙肝患者的DC虽然在功能上较正常人低，但仍能表达MHC和协同刺激分子，而且可刺激同种异体T细胞增殖，且与正常人一样，经过TNFa的刺激后可分泌大量的IL12，较未知加因子刺激时增加近10倍，IL12是DC分泌的一种关键性的细胞因它能够有效的诱导特异性的CTL的产生，因此TNF的应用是DC分泌的一种关键性的细胞因子，它能够有效的诱导特异性的CTL的产生，因此TNFα的应用是DC免疫治疗的重要环节。慢性乙肝患者DC还可以刺激抗原特异的CD4 和CD8 T细胞的活化，分泌必要的细胞因子，诱导抗原特异的免疫反应。经免疫表位多肽诱导的慢性乙肝患者DC可以在体外诱导特异性效应T细胞活化，并分泌对病毒清有重要作用的细胞因子［18］。因此理论上，将这种经诱导的DC回输至患者体内，可有望打破机体免疫耐受，清除体内的HBV。