核酸疫苗与寄生虫核酸疫苗的研究进展(3)

　　2　寄生虫核酸疫苗的研究状况

　　各种寄生虫病给人类健康带来严重危害已有目共睹，抗寄生虫感染是一个世界性公共卫生问题。作为综合防治措施之一的核酸疫苗研制已成为目前寄生虫病防治研究的热点之一。现有的寄生虫疫苗，包括基因工程蛋白疫苗，由于种种原因其保护率还不能令人满意，许多有关领域尚有待深入研究。核酸疫苗的出现给人类抗寄生虫感染带来了新希望。迄今为止，主要开展了对疟原虫［18］、囊虫［19］、血吸虫［20～23］及利什曼原虫［24］ 的核酸疫苗研究。

　　2.1　疟原虫核酸疫苗　疟疾疫苗的研制是疟疾防治中的重要内容，从70年代的全虫活疫苗，到80年代的基因工程亚单位疫苗（如MSP1、EMP1等）和化学合成多肽疫苗（如SPf66）,由于其激发的免疫反应低下，临床试验效果不佳。90年代核酸疫苗以其突出的优点，引起了研究人员的极大兴趣。Sedegah等用约氏疟原虫环子孢子蛋白（CSP）基因真核表达质粒肌肉注射小鼠后，同时产生抗环子孢子蛋白特异性抗体和CTL反应，两种反应的水平均高于减毒子孢子免疫的小鼠。接种DNA疫苗后，用5×105子孢子攻击感染后的肝期原虫负荷下降86%；经2～3次免疫接种的小鼠，再以102子孢子攻击，结果显示疫苗对68%的小鼠具有保护作用，说明核酸疫苗接种可用于抗疟疾感染［18］。目前，用作疟原虫核酸疫苗研究的保护性抗原基因主要有：CSP、MSA1、MSA2、SSP2、HEP17、EXP1和RESA等。

　　1997年Butler等在Nature上报道了一项临床试验，以一种编号QS21的试剂为佐剂，接种含环子孢子疟原虫蛋白基因的核酸疫苗，结果7个志愿者经感染有疟原虫的蚊子的反复叮咬后有6人获得了保护［25］。该项试验为寄生虫核酸疫苗应用于人体提供了宝贵的经验。

　　2.2　囊虫核酸疫苗　1997年文献［19］报道了核酸疫苗在抗囊虫感染中的应用。将编码绦虫保护性抗原基因(45 W)分别克隆到真核质粒表达载体pcDNA3和羊腺病毒载体(OAV200)，构建成pcDNA3-45W核酸疫苗和OAV205 重组病毒疫苗，分别给羊注射核酸疫苗和重组疫苗后再注射常用的45 W亚单位疫苗，引起的免疫反应比单独注射核酸疫苗和重组病毒疫苗要强；先注射核酸疫苗再注射重组病毒产生的IgG1要比分别注射至少高65倍。这两种方法都能保护羊抵抗绦虫卵的攻击。

　　2.3　血吸虫核酸疫苗　Yang和Waine等分别通过对小鼠肌肉注射携带编码日本血吸虫副肌球蛋白、26和28 KDa谷胱甘肽-S-转移酶、钙网硬蛋白、磷酸丙糖脱氢酶、22.6 KDa膜蛋白、14 KDa脂肪酸结合蛋白基因质粒DNA（该6种蛋白分子为目前公认有希望的血吸虫疫苗候选分子），但仅仅副肌球蛋白核酸疫苗诱导了鼠特异性抗体的产生［20，21］。而Kayes等用曼氏血吸虫28 KDaGST核酸疫苗免疫小鼠，在血清中测有特异性抗GST IgG抗体［22］。国内李传明等的实验结果也表明，日本血吸虫26 KDa GST-DNA疫苗免疫小鼠后能诱生一定水平的抗血吸虫抗体，免疫鼠可形成一定的预防血吸虫尾蚴感染的保护性免疫力;同时可减轻宿主肝组织血吸虫卵所致的病理损害作用［23］。

　　2.4　利什曼原虫核酸疫苗　Xu等用含编码利什曼原虫GP63基因核酸疫苗pcDNA1-GP63直接免疫BALB/c鼠，检测到质粒在小鼠至少存在40天，抗体免疫组化染色显示高水平表达的GP63。硕大利什曼原虫攻击感染，发现鼠已产生高度抵抗力。利什曼原虫抗原能诱导免疫小鼠产生高水平细胞因子，通过Th1型细胞免疫抵抗攻击。BALB/c小鼠一般对利什曼原虫感染敏感，因为它不能激活Th1反应，除非加入外源性的IL-12［25，26］。

　　3　结论

　　核酸疫苗的发生、发展时间虽不长，却已取得了许多可喜的成就。它具备的许多优点如操作方法简便，能同时诱导机体产生高水平保护性的体液和细胞免疫力，且安全、持效，有抗各种病原体感染及抗肿瘤的广阔应用前景，正引起各有关研究领域学者的强烈兴趣。但在研制核酸疫苗时，一些潜在的问题也不容忽视，它还有诸多不完善之处，离实际应用仍有相当多的工作要去做。综合目前有关文献，认为今后应该重点探讨和研究的问题如下。