二氮嗪对深低温脑缺血再灌注大鼠脑组织NR1表达(2)

　　 ①假手术组:102只，不夹闭左右颈总动脉，不注 射药物;②模型组:102只，术前腹腔内注射等体积生理盐水;③二氮嗪组:102只，术前腹腔内注射二氮嗪5mg · kg-1。模型组和二氮嗪组再分为缺血60 min再灌注后2、6、12h和1、2、3、7d共7个小组，假手术组分为术后2、6、12 h和1、2、3、7d共7个小组，每个小组 16只，其中6只用于脑组织含水量测定，10只用于石 蜡包埋后行免疫组化检测。

　　1.5 脑组织含水量测定

　　待测含水量的脑组织标本测定其湿质量及在电热 恒温干燥箱中100 ℃48h的干质量，以计算含水量。公式如下:含水量=（湿质量-干质量）/湿质量× 100%。

　　1.6 脑组织中NMDAR1的表达情况

　　大鼠脑组织予多聚甲醛灌注、固定，完毕后断头取脑，脑组织采用4%多聚甲醛溶液再固定约24h，常规脱水石蜡包埋切片，厚度4μm，取4张连续切片，操作步骤按SABC试剂盒操作说明进行，阴性对照以PBS代替一抗。步骤如下:切片常规脱蜡，3%H2O2灭活内 源性酶，热修复抗原，5%BSA封闭，加入兔抗大鼠NMDAR1多克隆抗体（1∶100）4℃过夜，再滴加生物素化山羊抗兔IgG室温保存20 min，SABC室温20min，滴加新鲜配置的DAB显色液进行显色，苏木素复染，常规脱水，透明，中性树胶封片后，光镜下观察。应用捷达801分析软件测定阳性细胞的灰度值，每张切片随机选择4个高倍视野（400×）观察并取其平均值，以灰度值来表示NR1的表达水平，灰度值越高，免疫组织化学染色越浅，NR1表达越低。

　　1.7 统计学处理

　　所有实验数据用 x-±s 表示，采用SPSS11.0统计软件进行析因设计资料的方差分析，组间比较采用单因素方差分析，两两组间均数之间比较采用SNK检验，相同时间点两组间比较用 t 检验，P