发酵黄芪对BALB/C小鼠免疫功能及细胞因子的作用(2)

　　2.6 腹腔巨噬细胞产生IL-1的诱生及测定[5]小鼠分组与喂饲方法同上。将24孔板中贴壁纯化的腹腔巨噬细胞各孔加入LPS(终浓度10 μg/ml)培养24 h后收获上清，为诱生的IL-1粗品，-20 ℃ 保存待测。无菌取C57BL/6小鼠胸腺细胞，用10%小牛血清的RPMI-1640清洗并调细胞浓度1×107个/ml，加入96孔平底板，每孔0.1 ml，同时加入1∶4稀释的诱生IL-1 0.1 ml，ConA(终浓度2.5 μg/ml)0.1 ml，每只鼠3个复孔，置5%CO2，37 ℃ 培养，用MTT比色法测定胸腺细胞的增殖。

　　2.7 脾细胞IL-2的诱生及测定[6]小鼠分组与喂饲方法同上。按常规制备脾细胞，调细胞浓度为2.5×106个/ml，置24孔板孔/1ml，加入ConA(终浓度2.5 μg/ml)1 ml/孔，置5% CO2，37 ℃ 培养40 h后，收获上清为诱生的IL-2，-20℃保存待测。常规制备正常小鼠脾细胞，调细胞浓度2.5×106个/ml，加入96孔平底板，每孔0.1 ml，加入1∶8稀释的诱生IL-2 0.1 ml，每只鼠3个复孔，同时加入ConA(终浓度2.5 μg/ml)0.1ml，5 %CO2，37 ℃ 培养，用MTT比色法测定T淋巴细胞的增殖。

　　2.8 统计学处理实验数据用±s表示，统计分析采用SPSS11.5软件进行F检验和q检验。

　　3 结果

　　3.1 发酵黄芪对小鼠脾、胸腺指数的作用由表1可见，黄芪及发酵黄芪与环磷酰胺组相比较对胸腺重量影响不明显，无显著性差异(P>0.05)，但是与环磷酰胺对照组比较可以显著提高脾脏指数，差异有显著性，且有剂量依赖关系，发酵黄芪可显著增加小鼠脾脏指数。表1 发酵黄芪对小鼠脾、胸腺指数的影响(±s)%

　　3.2 发酵黄芪对淋巴细胞增殖的影响由表 2 可见，发酵黄芪ig给药在高剂量能明显促进小鼠T 淋巴细胞的增值，发酵黄芪高剂量组与环磷酰胺对照组相比均能明显促进脾淋巴细胞分泌IL-2 ，且有剂量反应关系，能拮抗环磷酰胺对淋巴细胞的抑制作用。表2 发酵黄芪对小鼠T 淋巴细胞增殖及T细胞产生IL-2的影响(±s)

　　3.3 发酵黄芪对小鼠脾淋巴细胞亚群的影响表3表明，发酵黄芪ig给药在中、高剂量使CD3，CD4 ，CD4/CD8明显上调，拮抗环磷酰胺对淋巴细胞亚群的抑制作用。表3 发酵黄芪对小鼠脾淋巴细胞亚群的影响(±s)

　　3.4 发酵黄芪对腹腔巨噬细胞吞噬功能及分泌细胞因子IL-1的影响表4表明，发酵黄芪ig给药在中、高剂量能明显促进小鼠腹腔巨噬细胞的增值及IL-1的分泌，能拮抗环磷酰胺对淋巴细胞的抑制作用。

　　4 讨论

　　中药对机体具有一定的免疫调节作用，黄芪及其有效提纯物的免疫增强作用已被认识，机体免疫功能的提高对机体的抗病能力、保证人体健康有重要作用。表4 发酵黄芪对环磷酰胺抑制小鼠腹腔巨噬细胞功能及分泌IL-1的影响(±s)

　　胸腺和脾脏是机体重要的免疫器官，主要含有T 细胞、B 免疫细胞，在促有丝分裂剂的作用下会发生增殖反应和细胞因子的分泌。本试验结果表明发酵黄芪能通过增加小鼠脾脏指数，促进脾T淋巴细胞的增殖、活化，以及淋巴细胞亚群CD4+T细胞的上调、CD4+/CD8+比值上升，促进细胞因子IL-2的分泌提高机体的特异性 免疫功能。本实验发酵黄芪中、高剂量均能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能及IL-1的分泌; 提高机体的非特异性免疫功能。IL-1主要来源于腹腔巨噬细胞，具有多种生物学作用，可以提高T细胞的增殖能力、促进IL-2的合成和分泌而达到促进免疫功能的作用。

　　总之，本次实验结果提示传统中药的发酵处理，对小鼠的免疫功能不仅同样有增强作用，且疗效要强。采用生物发酵工艺加工炮制是传统中药的重要方法。目前我国来源于生药的活性成分的生物转化研究仍处于起步阶段。这为中药的二次开发提供一定的线索，值得进一步的研究。

【参考文献】