复乳法制备雪莲纳米粒的研究论文(2)

　　2.4 透射电镜实验(TEM)在经透射电镜扫描以前，对纳米溶液应进行处理：配制2%的磷钨酸溶液，将纳米溶液滴加在铜网上后，待表面烘干，滴加1～2滴2%的磷钨酸溶液进行染色，再在灯下将所制样品彻底烘干后进样观察。

　　2.5 载药量、包封率的测定采用HPLC法对纳米粒的载药量和包封率进行测定。根据雪莲的有效成分采用芦丁(Rutin)作为标准品，以黄酮类成分的含量反映药物的含量。使用迪马C18反相色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)在356 nm波长下以甲醇：0.1%磷酸水溶液5∶5为流动相[7];流速1ml/min。检测得芦丁的保留时间是4.86 min。取所制得的纳米溶液1 ml，用0.1μm微孔滤膜滤去纳米粒，滤液测定得游离药物的量WF，1 ml纳米溶液超声破坏30 min,加4倍甲醇沉淀PLGA，10 000 r/min离心30 min, 进样测定所得浓度×5为药物总量WT。每毫升纳米溶液冻干后质量为WN，每毫升纳米溶液中药物的投入量为WD。按下式计算包封率、载药量。包封率(%)=(WT-WF)/ WT载药量(%)= (WT-WF) /WN

　　2.6 体外释放实验[8，9]本实验根据2005版《中国药典》配制磷酸盐缓冲液PBS (pH=7.4)作为释放介质，考察雪莲纳米粒的体外释药曲线。剪取10cm长的透析袋，用沸水煮5～10 min,再用蒸馏水冲洗干净。取纳米溶液6 ml, 加12 ml释放介质，转入透析袋中，检查确保不漏液。将透析袋置于盛有70 ml释放介质(PBS)烧杯中，加搅拌子 37℃恒温50 r/min恒速磁力搅拌。在0，2 ，4 ，6 ，8 ，10 ，12 ，24 h后从透析袋外取溶液1.5 ml，同时补充相同体积的释放介质。将取出的样品进行HPLC检测，计算其中药物含量。配制相同药物浓度的雪莲原料药的PBS溶液，按同样方法测量释放速率。

　　3 结果

　　3.1 纳米粒的制备和形态考察本实验采用复乳法制备雪莲纳米粒，主要以粒径及包封率为表征参数，考察乳化剂和油相的用量对纳米粒形成的影响。

　　3.1.1 纳米粒的处方优化处方优化以能形成稳定、大小适度的纳米粒和较高的药物包封率为前提，主要从乳化剂的种类和用量、水油相之比等纳米粒形成的关键步骤来筛选优化处方。见表1～3。表1 内水相乳化剂的用量对纳米粒成型的影响　表2 二氯甲烷-丙酮的体积比对钠米粒成型及包封率的影响·　表3 油相(二氯甲烷-丙酮)的量对纳米粒成型的影响。

　　3.1.2 粒径测定粒径，测定结果见图1。纳米粒平均粒径为134.6 nm。图1 处方优化后制备成纳米粒的粒径分布

　　3.1.3 Zeta电位用Zeta电位仪测定其电位，测得平均Zeta电位为-8.06。说明纳米溶液较稳定。

　　3.1.4 透射电镜实验(TEM)用透射电镜观察到纳米粒的形态。见图2。图2 优化后处方制备纳米粒的电镜图　由电镜照片看出纳米粒形态为类球形,表面较光滑,大小均匀,纳米粒之间基本无黏连。

　　3.2 载药量、包封率和药物利用率包封率(%)=WT-WF/WT=42.83%载药量(%)=(WT-WF)/WN= 2.17%

　　3.3 体外释放实验原料药和纳米粒的体外释放实验结果如图3所示：图3 雪莲原料药和雪莲纳米粒体外释放曲线由HPLC测定，计算纳米粒溶液和雪莲原料药的体外累积释放率得知，雪莲原料药体外释放在2 h 达到82.14%，释放速度很快。而在相同条件下，纳米粒溶液在2 h时释放为2.08%，12 h后达39.57%，释放速度减缓，说明所制得纳米粒能达到较好的缓释效果。

　　4 讨论