姜黄生姜醇提物对幼龄SD大鼠前列腺的作用(2)

　　1.4.1醇提物的制备及含量测定参考文献[5-9]制备姜黄生姜提取物。取姜黄、生姜各500 g粉碎，混合均匀，加生药3倍量的70%(φ)乙醇回流2次，时间分别为1.5 h、1.0 h，过滤，合并滤液，回收，浓缩制成干膏(每克干膏相当于姜黄或生姜均为54 g)，以HPLC法对有效成分姜黄素进行定量。

　　1.4.2动物实验

　　1.4.2.1分组及给药将SD大鼠随机分成正常对照组，阳性药物组(己烯雌酚)，醇提物低、中、高剂量组(共5组)，每组13只。正常对照组及己烯雌酚组均按20 mL·kg-1体质量灌胃(ig)给予生理盐水(NS)，阳性药物组再按1 mg·kg-1体质量皮下注射(sc)己烯雌酚，每周均3次;低、中、高剂量组分别按20 mL·kg-1体质量ig给予醇提物(分别相当于生药8、22 、36 g·kg-1·d-1)。各组均自由饮水，摄食，连续3周(21 d)。

　　1.4.2.2解剖、计算于第22天称取大鼠体质量，取血，测定总酸性磷酸酶(TAP)水平;随后处死动物，剖取前列腺腹叶、侧叶、背叶及精囊腺、睾丸，分别称取湿质量，计算各脏器指数。

　　1.4.2.3统计学处理采用SPSS11.5统计软件进行数据处理，实验数据以(±s)表示，各组间数据比较采用t检验,以P<0.05为差异有显著性。

　　2结果

　　2.1HPLC法测定醇提物中姜黄素的含量

　　2.1.1色谱条件

　　参考文献[10-11]拟定以下色谱条件。色谱柱：Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相：乙腈-4%(φ)冰醋酸溶液(50∶50);流速：0.8 mL/min;柱温：25 ℃;检测波长：254 nm。

　　2.1.2流动相的选择

　　取姜黄素对照品适量，加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，精密量取10 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。分别以不同比例的流动相进样，最终确定乙腈-4%(φ)冰醋酸溶液比例为60∶40，在该条件下姜黄素的峰形较佳。

　　2.1.3λmax的选择

　　利用二极管阵列检测器在190～370 nm范围内对姜黄素对照品溶液进行扫描，结果在263 nm处具有最大吸收，故以263 nm为检测波长。

　　2.1.4线性试验

　　精密量取姜黄素对照品溶液(0.100 9 mg/mL)3、6、9、12、15、18 μL注入液相色谱仪，记录色谱图。以姜黄素色谱峰峰面积为纵坐标，进样量为横坐标绘制曲线，得回归方程为：Y=2575560X-51928.7，相关系数r2为0.999 909，表明姜黄素在0.3～1.8 μg范围内线性关系良好。

　　2.1.5精密度试验

　　精密量取上述对照品溶液(0.100 9 mg/mL)，连续进样5次，每次10 μL，记录色谱图，计算得姜黄素峰面积的平均值为2486170，RSD=0.5%(n=5)，表明测定的精密度良好。

　　2.1.6稳定性试验取姜黄素对照品加甲醇制成0.1 mg/mL的溶液，以0.45 μm滤膜滤过，作为姜黄素对照品溶液;另取醇提物约0.03 g，精密称定，置25 mL量瓶，加甲醇适量超声溶解，放冷、定容、滤过，再以0.45 μm滤膜滤过，作为供试品溶液。精密量取上述供试品溶液各10 μL分别在0、3、6、9、12 h注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算各时间点的含量及RSD(%)，结果得姜黄素平均含量为7.4%，RSD=1.9%，