首乌愈瘫片质量标准研究论文(2)

　　2.1.1决明子的鉴别[1-6]取本品5片，研细，称取1 g，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 mL使溶解，用乙醚振摇提取3次，每次20 mL，合并乙醚液，用5%(质量分数)Na2CO3溶液洗涤3次，每次30 mL，碱液弃去，乙醚液挥干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺决明子阴性对照样品1 g,同法制得缺决明子阴性对照样品溶液。另取大黄酚对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg的大黄酚对照品溶液。按照薄层色谱法[7]试验，精密吸取上述供试品溶液、缺决明子阴性对照样品溶液各3 μL及大黄酚对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(体积比8∶2∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照无干扰。结果见图1。

　　2.1.2槲寄生的鉴别精密称取齐墩果酸对照品适量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。取缺槲寄生阴性对照样品1 g，按“211”项下方法操作，制得缺槲寄生阴性对照样品溶液。按照薄层色谱法[7]试验，精密吸取“211”项下供试品溶液、缺槲寄生阴性对照样品溶液各3 μL，对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(体积比4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%(φ)的硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图2。[PSD161;S*2〗1.大黄酚对照品; 2～4.供试品; 5.阴性对照图1决明子TLC鉴别图谱Figure 1TLC Chromatogram of Semen Cassiae in ShouwuYutan tablets[PSD162;S*2〗1.齐墩果酸对照品; 2～4.供试品; 5.阴性对照图2槲寄生TLC鉴别图谱Figure 2TLC Chromatogram of Herba Visci in Shouwu Yutan tablets

　　2.1.3海马的鉴别取三斑海马药材0.2 g，加乙醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至约2 mL，作为对照药材溶液。取缺海马阴性对照样品1 g，按“2.1.1”项下方法操作，制得缺海马阴性对照样品溶液。按薄层色谱法[7]试验，精密吸取“211”项下供试品溶液、海马对照药材溶液、缺海马阴性对照样品溶液各6 μL点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-丙酮(体积比4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%(φ)硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照无干扰。结果见图3。

　　2.1.4淫羊藿的鉴别取“2.1.1”项下乙醚萃取后的水液，以乙酸乙酯振摇提取2次，每次20 mL，合并乙酸乙酯液，挥干，残渣加乙醇10 mL使溶解，作为供试品溶液。另精密称取淫羊藿苷对照品适量，加70%(φ)乙醇制成每1 mL含0.1 mg的淫羊藿苷对照品溶液。取缺淫羊藿阴性对照样品1 g，按“2.1.1”项下方法操作，得缺淫羊藿阴性对照样品溶液。按薄层色谱法[7]试验，精密吸取供试品溶液、淫羊藿苷对照品溶液、缺淫羊藿阴性对照样品溶液各0.5 μL，点于同一聚酰胺薄膜上，以36%(φ)醋酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%(ρ)三氯化铝乙醇溶液，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。结果见图4。[PSD163;S*2〗1.阴性对照; 2～4.供试品; 5.海马对照药材图3海马TLC鉴别图谱Figure 3TLC Chromatogram of Hippocampus in Shouwu Yutan tablets　　[PSD164;S*2〗1.淫羊藿苷对照品; 2～4.供试品; 5.阴性对照图4淫羊藿TLC鉴别图谱Figure 4TLC Chromatogram of Herba Epimedii in Shouwu Yutan tablets

　　2.2.1对照品溶液的制备精密称取二苯乙烯苷对照品适量，加流动相制成每1 mL含二苯乙烯苷0.25 mg的溶液，即得。

　　2.2.2供试品溶液的制备取本品5片，研细，称取0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇30 mL，称定质量，超声处理20 min，取出，放冷，再称定质量，用甲醇补足失去的质量，滤过，取续滤液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，即得。

　　2.2.3阴性对照溶液的制备按处方比例称取缺制何首乌的其他药材适量，依照首乌愈瘫片的制备工艺和供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液。

　　2.2.4色谱条件与系统适用性试验采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，甲醇-水(体积比35∶65)为流动相，流速1.0 mL·min-1，检测波长为320 nm。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各0.5 μL注入液相色谱仪，理论板数按二苯乙烯苷计不得少于2 000，阴性对照溶液在与二苯乙烯苷相同保留时间的位置无色谱峰的出现，见图5。　[PSD165〗1.二苯乙烯苷图5二苯乙烯苷对照品(A)、首乌愈瘫片(B)和阴性对照(C)的HPLC图谱Figure 5HPLC Chromatograms of reference substance(A),Shouwu Yutan tablets (B) and negative sample(C)

　　2.2.5标准曲线的制备精密称取80 ℃干燥至恒重的二苯乙烯苷对照品，