补肾健脾法对卵巢早衰小鼠抑制素B含量及基因表(2)

　　2.1各组小鼠的一般情况造模后各组均出现不同程度的活动、摄食增加,略显活跃,烦躁,攀爬噬咬鼠笼,毛松缺乏光泽较干枯,大便增多。

　　2.2各组小鼠造模前后阴道涂片观察比较正常对照组小鼠阴道细胞涂片结果：动情周期规律,可见大量角化细胞及羊齿状结晶,细胞着色较深。免疫造模后小鼠阴道细胞涂片结果：模型组动情期紊乱,细胞无周期性改变,上皮细胞体积明显缩小,较幼稚,角化细胞和羊齿状结晶明显减少,渐消失，并逐渐被白细胞所代替。中药治疗组动情期不典型,角化细胞和羊齿状结晶亦减少。中药预防组动情间期延长,角化细胞和羊齿状结晶略减少,细胞着色较正常组稍淡。

　　2.3各组小鼠卵巢病理改变肉眼观察见模型组卵巢体积较正常组卵巢缩小,双角子宫变细长,部分卵巢与周围粘连。光镜检查显示：与正常对照组比较,中药预防组卵泡数目略减少,余无明显改变。中药治疗组除生长成熟卵泡减少外,部分卵母细胞及透明带形态异常,厚薄不均,扭曲,部分断裂,周边颗粒细胞排列紊乱,细胞形态不规则；闭锁卵泡增多,且细胞结构紊乱。模型组未见明显生长或成熟卵泡(图1，见彩图页第665页)。

　　2.4各组小鼠血清INHB含量比较表1结果显示：模型组小鼠血清INHB含量显著降低(P<0.05)，中药预防组血清INHB含量显著升高，与模型组及中药治疗组比较差异均有显著性意义(P<0.05)，中药治疗组对血清INHB含量无影响(P>0.05)。表1各组小鼠血清INHB含量比较(略)

　　统计方法：单因素方差分析；①P<0.05,与正常对照组比较；②P<0.05,与模型组比较；③ P<0.05,与中药治疗组比较

　　2.5各组INHB mRNA相对表达量比较表2、图2结果显示：小鼠卵巢组织INHB mRNA相对表达量模型组显著降低(P<0.01)，中药预防组与中药治疗组均显著升高(P<0.05或P<0.01)，且中药预防组作用优于中药治疗组(P<0.01)。表2各组INHB mRNA相对表达量比较(略)

　　统计方法：单因素方差分析；①P<0.01,与正常对照组比较；② P<0.05,③P<0.01,与模型组比较；④ P<0.01,与中药治疗组比较a.

　　3讨论

　　3.1自身免疫性卵巢功能衰退模型的建立临床上发现部分卵巢早衰患者有自身免疫反应过强的现象,亦有病理检测发现部分患者的卵巢有淋巴细胞浸润,诊断为自身免疫性卵巢炎［7］。通过免疫方法造模是目前国内外卵巢早衰模型较为常用且相对成熟的一种方法［7］。

　　建立自身免疫性疾病模型通常有3种方法［8］：①将正常T细胞转移至无胸腺的裸鼠体内；②切除新生3 d动物的胸腺；③应用来自自身组织的特异性肽链进行主动免疫。有文献报道［9］切除新生小鼠或大鼠胸腺可造成多腺体自身免疫性疾病,如自身免疫性甲状腺炎、溃疡性结肠炎等,往往多种疾病同时并存。BALB/c小鼠为个体遗传性状近乎一致的纯系小鼠,以SD大鼠卵巢作为特异性抗原免疫小鼠产生单纯免疫性卵巢炎,即相当于应用来自该组织的特异性肽链进行主动免疫产生的自身免疫性疾病,避免了多腺体疾病的交叉影响,研究可更直接,更纯一［7］。因此,本研究设计采用这种方式复制动物模型。3次免疫后,小鼠动情周期的改变、卵巢功能的减退、组织病理的损伤等均证实自身免疫性卵巢功能衰退动物模型的复制成功。

　　3.2POF检测血清INHB含量的意义抑制素(inhibin,INH)属于转化生长因子β(TGFβ)超家族成员,是抑制FSH分泌的重要抑制因子［10］。抑制素降低引起FSH升高的变化反映了处于卵巢年龄的卵泡反应性和能力的降低［2］。精确监测表明［11］,INHB是卵泡期颗粒细胞分泌的主要形式。研究认为［2］卵巢储备功能低下的妇女,卵泡颗粒细胞INHB的产生减少,不能将FSH抑制在正常范围内,提示卵泡衰老。 45~49岁围绝经期妇女卵泡期INHB水平较低,FSH水平较高,进一步证实INHB和FSH之间的相互关系。故将早期INHB的下降考虑为卵巢储备功能下降的关键环节，而测定血清INHB可作为预测POF最灵敏的指标［2］。由卵巢颗粒细胞分泌的INHB水平直接反映卵巢的储备功能 ［12］。一般认为卵泡早期测定时血清FSH水平超过20 U/L,或超过10 U/L并伴有抑制素水平下降,提示卵巢储备功能已经降低,患者可能已经步入卵巢功能衰退进程中［13］。

　　3.3各组小鼠给药后血清INHB含量变化与INHB mRNA表达差异的关系中医学中无卵巢早衰的病名,但与此病类似的记载散见于“月经后期”、“月经过少”、“年未老经水断”、“闭经”、“血枯”、“血隔”、“不孕症”等病症中。肾藏精且主生殖,肾气的盛衰,直接关系到肾—天癸—冲任—胞宫轴的功能状态,成为主宰孕育的根本。脾胃为后天之本,气血生化之源。《女科经纶》说：“妇人经水与乳,俱由脾胃所生。”因此,脾肾亏虚是该病的重要病机。方中菟丝子辛、甘、平,归肾、肝、脾经,功能补肾益精养肝,平补肾阴阳,是调经、种子、安胎首选药；人参味甘微温,归脾、心经,功能大补元气补脾益肺,安神益智。菟丝子、人参共为君药。枸杞子补血养阴,填精益髓,滋养肝肾,与淫羊藿温肾壮阳,共助君为臣。君臣合用既能大补气血精,又能调补肾阴阳。柴胡、丹参疏肝活血为佐,炙甘草补脾益气、调和诸药为使。诸药共奏补肾健脾之效。本研究结果显示：中药预防组可显著升高血清INHB含量及卵巢组织INHB mRNA相对表达量，中药治疗组可显著升高卵巢组织INHB相对表达量，对血清INHB含量无明显影响，表明中药预防组作用优于中药治疗组。各组小鼠血清INHB含量与INHB mRNA表达的变化有相似的趋势。INHB mRNA及INHB的变化规律说明其蛋白的表达增加或减少是由基因的转录水平升高或下降引起的，从而推测这可能是补肾健脾中药治疗卵巢功能早衰的一个重要机理：通过增强卵巢组织INHB mRNA的表达,从而提高INHB的含量,改善卵巢的储备功能，可从早期对卵巢储备功能的下降起阻碍或延缓的作用。

【参考文献】 （科教范文网 fw.nseac.com编辑发布）
  　　［1］王伟,李继俊.卵巢早衰的病因学研究进展［J］.现代妇产科进展,2002,11(2):136．