论补肾生精法对老龄大鼠睾丸蛋白表达谱的影响(2)
2013-12-10 01:06
导读：1.6 图像分析 采用凝胶成像仪扫描成二值图像格式（TIFF 格式）图像(分辨率为300 dpi)，然后用ImageMaster 2D platinum software 5.0 软件进行差异分析。 1.7 酶切和质
1.6 图像分析 采用凝胶成像仪扫描成二值图像格式（TIFF 格式）图像(分辨率为300 dpi)，然后用ImageMaster 2D platinum software 5.0 软件进行差异分析。
1.7 酶切和质谱分析 观察差异蛋白点在凝胶上的原始位置，切下满足下面两个条件的蛋白点进行质谱分析：(1)在4次重复胶上均能找到，且差异显著；(2)无明显拖尾、变形，且完全分离。将蛋白胶粒均匀切碎，置1.5 mL 离心管中，用去离子水清洗2 次，加入脱色液(体积分数50% 乙腈、25 mmol/L 碳酸氢铵) 100 μL，摇床振荡20 min，弃去溶液，重复2 次，直至胶片中的蓝色脱尽，真空离心干燥；加入适量胰酶液(0.01μg/μL，含25 mmol/L碳酸氢铵，5mmol/L 氯化钙)，置于4℃冰箱泡胀20～30 min，酶液被完全吸收后，补充5～10 μL 酶解缓冲液，37℃过夜(约16 h); 离心，吸取1 μL 酶解液，与饱
