关于体外肝代谢系统的研究与应用论文(2)
2014-01-23 01:23
导读：将药物加入肝微粒体中进行孵育后，利用质谱检测离子碎片来鉴定代谢物的结构，包括药物不同位点上的羟化物或去烷基产物，从而确定代谢途径。有报道
将药物加入肝微粒体中进行孵育后，利用质谱检测离子碎片来鉴定代谢物的结构，包括药物不同位点上的羟化物或去烷基产物，从而确定代谢途径。有报道指出［8］，新型抗焦虑药AF5加入人肝微粒体中进行孵育，经GC睲S分析，鉴定出两种主要代谢产物：4掺腔睞F5（Ⅰ）及4掺驶睞F5（Ⅱ）。AF5在肝微粒体中代谢的主要产物为Ⅰ，Ⅰ在人肝微粒体中，可进一步转化为Ⅱ，后者不再被代谢。
1.2.4考察手性药物的代谢立体选择性
周权等［9］把手性药物与大鼠肝微粒体相结合，对其立体选择性代谢作了详细的考察。作者把R/S财章夼镣（propafenone，PPF）加入经地塞米松或β草粱仆诱导的大鼠肝微粒体中孵育，经提取及手性拆分后，进入HPLC系统分析。结果显示，与对照组相比，在经诱导的肝微粒体中，PPF的Ⅰ相代谢呈显著的立体选择性。
总之，改进后的体外肝微粒体法耗时少，重现性好，易大量操作。适用于酶活性及体外代谢清除等方面的研究，在实际工作中应用较广。但同其他体外肝代谢方法相比，需要的原材料较多，且与体内情况的一致性方面存在不足，因而其结果是否有利预测体内情况仍需进一步研究。
2基因重组人肝微粒体CYP450酶系
利用基因工程及细胞工程，将调控CYP450酶系表达的基因整合到大肠杆菌或昆虫细胞，再经培养可表达高水平的CYP450酶系，纯化后还可获得较单一的CYP450同工酶。在明确某些药物经特定酶代谢后，即以此酶进行单一代谢，更准确地观察代谢结果，避免受其他酶共同参与此代谢途径的干扰。Ching等［10］通过在酵母中克隆方法，得到高表达的人CYP 1A1和CYP 1A2，用于测定普萘洛尔对映体的去烃基化和环羟化反应的立体选择性和酶动
力学参数，明确了CYP 1A2均参与了2种途径，但CYP 1A1只参与了去烃化反应。有学者进一步运用重组人肝微粒体，应用酶抑制剂对普萘洛尔对映体的代谢途径进行对照实验［11-13］。其中Yoshimoto等［12］ 应用基因重组的及人肝微粒体中的CYP酶系同工酶进行研究，发现α草粱仆对普萘洛尔R/S对映体的N餐岩毂基化（desisopropylation）抑制作用分别为20%和40%；奎尼丁对其2种对映体的4不肤腔代谢的抑制作用较完全；而其他酶抑制剂对其对映体的影响较小。
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基因重组CYP450酶系与前述的肝微粒体在研究药物代谢方面具有一定的相关性。但前者在药酶诱导特异性和选择性研究上优于其他的体外方法，并可在分子水平上，为药物与酶在结合位点
