重组人生长激素作用下成骨细胞细胞周期及细胞
2014-01-25 01:29
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作者：郭三萍，石勇，李晓红，宋玮 【关键词】 成骨细胞
作者：郭三萍，石勇，李晓红，宋玮
【关键词】 成骨细胞；重组人生长激素；细胞周期;细胞骨架
【Abstract】 AIM: To observe the changes of the cell cycle and cytoskeleton of rat calvarial osteoblasts after stimulated by recombinant human growth hormone (rhgh ). METHODS: Osteoblastic cells from rats were incubated in the medium supplemented wiht rhgh at different doses (10, 200 μg/L), and then the changes of cytoskeleton and cell cycle were detected. RESULTS: Quantitative analysis showed that osteoblasts were arrested in S phase and G2/M phase, however, green fluorescent density and red fluorescent density (nuclei) were not significantly changed. The filamentous Factin distributed in bunches and was stained strongly and evenly. The outline of nucleus was clear. CONCLUSION: Rhgh exerts a direct anabolic effect on osteoblasts, but no obvious effect on cytoskeleton of rat osteoblasts.
【Keywords】 osteoblasts; recombinant human growth hormone; cell cycle; cytoskeleton
【摘要】目的： 观察重组人生长激素（rhgh ）对体外成骨细胞（OB）细胞周期及细胞骨架Factin的影响. 方法：用浓度为10和200 μg/L的重组人生长激素加入大鼠OB培养体系，观察对大鼠OB的细胞周期及细胞骨架的影响. 结果： 定量分析表明，在rhgh 作用下，成骨细胞S期、G2/M期细胞百分比增加,OB的绿色荧光强度、红色荧光强度无显著变化. Factin纤维呈束状平行排列，荧光染色强，分布均匀. 结论：重组人生长激素对OB的合成代谢有直接影响,但对细胞骨架无显著影响.
【关键词】 成骨细胞；重组人生长激素；细胞周期;细胞骨架
口腔颌骨、牙槽骨骨量丢失是影响牙齿留存、义齿及种植体修复效果的重要因素. 骨质疏松症(osteoporosis, OP）患者的颌骨具有不同程度的骨量丧失,OP与牙齿脱落之间也有密切的相关性［1］. 生长激素在人体生长发育中起着重要的作用，能促进蛋白质合成，影响脂肪和矿物质代谢，促进内脏、骨骼和全身生长. 基因重组人生长激素（recombinant human growth hormone, rhgh ）与人体生长激素具有同等的作用. rhgh 影响骨代谢的作用机制一般有直接和间接两种方式. 直接方式是指rhgh通过成骨细胞（osteoblast, OB）的相关受体发挥作用［2］；间接方式是可以通过促进胰岛素样生长因子(IGFI)的合成促进骨形成［3］. 我们观察不同浓度的rhgh 对体外培养OB细胞周期及细胞骨架的影响，以期对颌骨骨质疏松的防治提供实验依据.
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1材料和方法
1.1材料rhgh(长春金赛药业有限责任公司）；出生2 d的SD大鼠（
第四军医大学实验动物研究中心）；FITC标记的鬼笔环肽（Phalloidin）（Sigma） ；碘化丙啶（PI）（Sigma）; Triton X100(华美
生物工程公司)；流式细胞仪（美国）；激光共聚焦显微镜 BioRad MRC1024 （美国）.
1.2方法
1.2.1大鼠颅骨OB的体外培养取出生2 d的SD大鼠，弯剪断头，将头部浸入PBS培养液中分离颅盖骨. 将分离好的颅盖骨在含血清的DMEM的培养液中剪碎，大小约为1 mm3. 用眼科镊将组织块接种于25 mL培养瓶的底部并用探针均匀拨开，每瓶接种约20～30块. 将培养瓶底部向上加入含100 mL/L胎牛血清的DMEM培养液，盖好瓶盖后再松半圈，放入CO2孵箱中，37℃ 500 mL/L CO2孵育2 h，然后翻转使瓶底朝下,以后每3 d换液1 次,待细胞铺满培养瓶时,以2.5 g/L胰蛋白酶消化,并传代培养,所用实验细胞均为第6代细胞.
1.2.2OB的鉴定免疫组化检测细胞I型胶原的表达阳性，重氮盐法检测细胞具有碱性磷酸酶活性，四环素荧光染色法检测细胞具有矿化能力，提示实验原代培养细胞为OB.
1.2.3实验分组① 空白对照组用基础培养基；② 实验组培养基中含有重组人生长激素，浓度为10和200 μg/L.
