肉苁蓉提取物对帕金森病细胞损伤模型的保护作(2)
2014-02-27 01:13
导读：1.2.4 Western blotting检测GADD153蛋白表达 终浓度1 mmol/L MPP 与肉苁蓉提取物分别为1、10和100 μg/ml，同时加入6孔板置5% CO2培养箱37 ℃孵育48 h。取出6孔培养板，
1.2.4 Western blotting检测GADD153蛋白表达 终浓度1 mmol/L MPP 与肉苁蓉提取物分别为1、10和100 μg/ml，同时加入6孔板置5% CO2培养箱37 ℃孵育48 h。取出6孔培养板，PBS冲洗，加入60 μl蛋白裂解液裂解，超声震荡，100 ℃变性10 min。用Lowry法测定样品蛋白浓度。电泳：积层胶60 V 30min，分离胶120 V 90 min；PVDF膜转膜110 V 100 min。加1∶50小鼠抗人GADD153单克隆抗体，4 ℃过夜。TBST溶液洗涤3次，10 min/次，加含HRP的兔抗小鼠二抗室温孵育2 h，
化学发光法显影X胶片。胶片用Alpha Image 950自动扫胶系统得到条带灰度值。每个样本的免疫印迹条带均与同一样本的β瞐ctin比较后作
统计学分析。
1.3 统计学方法 采用SPSS 11.5软件进行单因素方差分析。计量资料数据用x±s表示。
2 结果
2.1 MPP 对SH睸Y5Y细胞存活率的影响 不同浓度MPP 作用SH睸Y5Y细胞后，细胞存活率随MPP 的浓度增加而降低；MPP 1 mmol/L浓度状态下细胞存活率随时间增长而降低。呈现明显的量效与时效关系。见图1。其中MPP 1 mmol/L组在48 h存活率为（45.30±3.21）%，低于50%。故选用1 mmol/L MPP 作为制作帕金森病细胞模型的处理剂量。
图1 不同浓度MPP 对SH睸Y5Y存活率的影响（略）
Figure 1 Effects of different concentrations of MPP on cell viability of SH睸Y5Y
2.2
