对两种凝血酶原提取方法的比较论文(2)
2014-04-30 02:02
导读：根据文献［6］，采用Bradford法测定样品的蛋白质浓度，以牛血清白蛋白为标准品，每个样本平行测2次，取平均值。根据公式：酶比活性=酶效价/溶液蛋白质
根据文献［6］，采用Bradford法测定样品的蛋白质浓度，以牛血清白蛋白为标准品，每个样本平行测2次，取平均值。根据公式：酶比活性=酶效价/溶液蛋白质浓度，计算凝血酶溶液的比活性。
2 结果与分析
以凝血酶标准品溶液效价 (U/mL)为X，对应的凝固时间（sec）为Y进行直线回归处理，并求得直线回归方程，所得方程式为：Y=62.9135.994X，r≈0.994 8.将凝血酶样品的凝固时间代入回归方程，即可计算得出样品的凝血酶效价(见表1、图1)。
采用等电点沉淀法得到的凝血酶原经激活后，凝血酶的比活性为11.01±1.54 U/mg，而采用柠檬酸钡吸附法提取得到的凝血酶原经激活后，凝血酶的比活性可达到130.17±12.30 U/mg。其比活性经配对样本t检验
统计学分析后，其概率P=3.54×105＜0.01，说明两种方法得到的凝血酶比活性有显著性差异，后者约为前者的11.8倍。从两种方法所得到的凝血酶溶液的酶活性和蛋白质浓度分析，造成两者酶比活性差异的主要原因在于凝血酶的纯度差异，凝血酶纯度越高，比活性就越高。等电点沉淀法提取的凝血酶原溶液含杂蛋白较多，需要进一步纯化，以提高酶的比活性。因而，采用柠檬酸钡吸附法从猪血浆中提取凝血酶原大大优于等电点沉淀法，得到的凝血酶纯度较高。
3 讨论
