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研究地榆提取物的抗氧化与抗过敏作用及其相关

2014-04-29 01:30

摘要:　目的研究地榆提取物的抗氧化与抗过敏作用及其相关性。方法地榆经乙醇提取，有机溶剂萃取，大孔树脂HP-20分离纯化，获得不同提取部分。采用透明质酸酶抑制率及对DPPH、羟基自由基、过氧化氢的清除作用来检测提取物活性。结果地榆大孔树脂40%乙醇洗脱物透明质酸酶的抑制率与各自由基清除率是所有提取物中最高的，其自由基清除率接近于原花青素和芦丁，大于维生素C和儿茶素；地榆的提取物浓度与透明质酸酶抑制率、氧自由基清除作用成正相关性。结论地榆是一种值得开发的抗过敏、抗氧化植物；地榆提取物的抗过敏机制与其具有较强的氧自由基清除作用有关。

关键词: 地榆 抗氧化 抗过敏

　　地榆Sanguisorba officinalis L.是蔷薇科(Rosaceae)地榆属Sanguisorba L.植物的根及根状茎,具有凉血止血，解毒敛疮功效。主要分布于中国东北 、华北 、西北 、华东 、中南及广西 ，广布于欧洲和亚洲北温带，主要成分为鞣质和三萜皂苷。研究表明地榆提取物能对抗ONOO-的肾损害作用，抑制细胞凋亡，改善氧化应激和氧化损伤作用［1～3］。国外Katsumata［4］报道抗氧化剂可以有效治疗过敏性疾病，因为活性氧如超氧阴离子自由基、羟自由基促使肥大细胞释放组胺，产生过敏反应，因此，从地榆的成分以及抗炎症、抗氧化的效果看，地榆可能是良好的抗过敏植物来源。
　　但是从目前的文献报道来看，地榆的抗过敏研究报道较少，主要集中在地榆的粗提物上，如地榆水提液可以明显使实验小鼠增强2，4-二硝基氯苯所致迟发型过敏反应，使鼠耳重量增加，具免疫增强作用［5］。地榆根的粗提物能够抑制组胺介质的释放和TNF-α的产生，具有良好治疗即时型过敏的效果［6］。虽然Park KH通过老鼠的被动皮肤测试及由compound 48/80 和Ca2 引发的过敏测试，表明了地榆对肥大细胞的抑制作用，其主要作用成分为5-O－α-D-(3-C－羟甲基) 呋喃来苏糖基－β－D－（2-羟甲基）阿拉伯呋喃糖的双糖［7］，但没有更多的报道过抗过敏的有效成分。鉴于纯天然植物的安全无副作用以及地榆的研究现状，本文对地榆的粗提物进行了初步分离，探讨地榆提取物的抗氧化与抑制透明质酸酶间的作用和内在的关系，为抗过敏植物资源的开发提供理论基础。

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　　1 材料与仪器
　　1.1 试剂透明质酸钾、透明质酸酶，Sigma公司产品；对-二甲氨基苯甲醛（AR），上海试剂二厂产品；乙酰丙酮，天津试剂厂产品；邻二氮菲，北京爱芳医药化工研制公司产品；过氧化氢，中国医药(集团)上海化学试剂公司产品；三(羟甲基)氨基甲烷，成都科龙化工试剂厂产品。
　　1.2 材料地榆，购于南宁市国人大药房。
　　1.3 仪器大孔树脂HP-20，北京绿百草公司产品；紫外分光光度计，日本岛津产品；恒温水浴锅，北京市医疗设备厂产品；微量移液器，上海精密仪器厂产品；冷冻液循环泵，郑州长城科工贸有限公司产品；真空冷冻干燥系统，美国LABCONCO公司产品。
　　2 方法
　　2.1 提取分离方法取地榆500 g，采用60%乙醇,70℃提取，冷冻干燥得到粗提物A，粗提物依次用氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取，并分别冷冻干燥得到样B，样C，样D，以及萃余物水相E组分；用大孔树脂HP-20对样E进行分离,洗脱体积均为2 BV,流速:1 BV/h,长径比:12∶1，收集水、10%乙醇、40%乙醇和70%乙醇4部分的洗脱液， 冷冻浓缩干燥分别得到样F，样G，样H，样I 4个样品。
　　2.2 透明质酸酶抑制率实验抗过敏活性检测：Elson-Morgan 改良法［8］的方法进行测定，并计算各个样品的抑制率。
　　2.3 抗氧化实验
　　2.3.1 羟基自由基的测定［9］将样品配成浓度为0.4 mg·ml-1的溶液，取3只试管，分别加入2 ml pH=7.4的磷酸盐缓冲液，1 ml 1.5mmol·L-1的邻二氮菲溶液，充分混匀后，再加入1 ml 1.5mmol·L-1 FeSO4溶液，每加1管立即混匀，然后向其中1支试管加入1 ml的溶液（每次所加的体积不同），混匀。另两支试管分别为损伤管和未损伤管，