持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立(2)
2014-12-22 02:10
导读：1.2.2实验分组以BALB/c小鼠为受鼠的A, B, C, D, E组，均接受9 Gy的TBI预处理： A组（8只）输注正常SD大鼠的骨髓细胞; B组（8只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞;C组
1.2.2实验分组以BALB/c小鼠为受鼠的A, B, C, D, E组，均接受9 Gy的TBI预处理： A组（8只）输注正常SD大鼠的骨髓细胞; B组（8只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞;C组（6只）为自体移植组，D组（6只）为预处理组，不输注骨髓. 以无关第3者B6小鼠为受鼠的E组（6只）输注嵌合体SD大鼠的骨髓细胞.
1.2.3组织病理检查出现移植物抗宿主病表现的小鼠,濒死前活杀,B组存活者于移植后第60日处死，取其肝、小肠和皮肤标本,以100 mL/L甲醛溶液固定,常规石蜡包埋、切片,HE染色,光镜下观察. 按Thomas GVHD病理组织学分级标准判定［2］.
1.2.4嵌合率的测定取移植后小鼠外周血,加入FITC标记的 抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(每1×106细胞中加入1 μg),避光,4℃, 30 min. 红细胞裂解液去掉红细胞,PBS洗涤2次,流式细胞仪检测嵌合率.
1.2.5皮肤移植及存活情况的观察参考文献［3］的方法,每日观察皮毛,如变硬或脱落视为移植排斥,柔软或鼠毛生长视为移植存活.
1.2.6混合淋巴细胞反应（MLR）移植后30 d，分别取A,B组小鼠与正常BALB/c小鼠的脾细胞为反应细胞，以正常SD大鼠与Whistar大鼠脾细胞为刺激细胞，做混合淋巴细胞反应（MLR），丝裂霉素灭活
