持久稳定的大鼠→小鼠造血嵌合体模型的建立
2014-12-22 02:10
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作者：武小娟，李春富，唐湘凤，石磊 【关键词】 骨髓
作者：武小娟，李春富，唐湘凤，石磊
【关键词】 骨髓移植
Establishment of stable rat→mouse hematopoietic chimera model
【Abstract】 AIM: To establish a stable animal model of hematopoietic chimerism. METHODS: Conditioned SD rats received bone marrow cells from BALB/c mouse to induce xenogeneic chimeric rats. Thirty days later, lethally irradiated BALB/c mice received bone marrow cells from chimeric rats and their survival rate was monitored daily. Recipients splenic cells were stimulated in mixed lymphocyte culture (MLC) with xenoantigen and skin transplantation was carried out on day 30. RESULTS: Acute graft versus host disease was significantly alleviated, the survival time was prolonged and T cell proliferation was inhibited. More stable xenogeneic chimerism over 90 d was achieved via reverse bone marrow transplantation. CONCLUSION: A longterm xenogeneic chimera model is established by transplanting bone marrow cells of chimeras.
【Keywords】 chimera model; wholebody irradiation; bone marrow transplantation
【摘要】 目的： 建立持久稳定的造血嵌合体模型. 方法： 将预处理后的SD大鼠经尾静脉注射BALB/c小鼠骨髓细胞，诱导形成特异性耐受的嵌合体SD大鼠. 30 d后，再将此嵌合体大鼠的骨髓反向移植给致死性照射后的BALB/c小鼠，监测小鼠的存活率，移植后30 d做皮片移植和混合淋巴细胞培养，观察小鼠嵌合率的变化. 结果： 嵌合体模型小鼠仅有轻度移植物抗宿主病的表现，生存期明显延长，移植后嵌合率较稳定，移植皮片存活期延长，与对照组相比有显著性差异. 结论： 通过输入嵌合体骨髓的方法可建立稳定持久的大鼠→小鼠嵌合体模型.
【关键词】 嵌合体模型；全身照射；骨髓移植
0引言
大鼠→小鼠的骨髓移植，通过对受体进行强烈的清髓性预处理或注射大量骨髓以获得可靠植活，但异种移植物抗宿主病（XGVHD）较强，且嵌合状态随时间延长逐渐消失. 为建立稳定的异种造血嵌合体，我们研究了协调性动物（大鼠小鼠）的骨髓移植模型，因为他们之间不存在天然的抗体，对异种移植物不会发生超急排斥(hyperacute rejection, HAR). 先对供者进行预处理，使其产生对小鼠的特异性耐受，再将此嵌合体大鼠的骨髓反向移植给小鼠. 由于此前嵌合体大鼠已对小鼠产生了特异性耐受，故将此耐受的骨髓植入小鼠体内可明显减轻XGVHD，并诱导出持久稳定的嵌合状态.
（转载自http://www.ＮＳＥＡＣ.com中国科教评价网）
1材料和方法
1.1材料
SD大鼠(SPF级)8只，雌性，8～10周龄. C57BL/6(H2b)小鼠6只，雌性，8～10周龄. BALB/c(H2 d)小鼠40只（包括在MLR和病理检查中处死的小鼠，不编入各组计数），雌性，8～10周龄，均购自第一军医大学实验动物中心,并饲养在清洁实验动物中心层流仓. PE标记的抗小鼠H2DdmAb(PharMingen公司)；FITC标记的抗大鼠MHCCLASSⅠmAb(Serotec公司)；3HTdR（中国原子能研究所）；60Co照射源(广东省辐照中心)；流式细胞仪（FACScan; Becton Dickinson）；自动液闪计数器（Beckman, USA）.
1.2方法
1.2.1嵌合体模型的建立SD大鼠于术前5 d开始饮含红霉素(250 mg/L)和庆大霉素(320 mg/L)的抗生素溶液. 无菌条件下取BALB/c小鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液, SD大鼠接受8Gy（照射率0.5 Gy/min）全身照射(TBI)后4 h内经尾静脉输入BALB/c小鼠骨髓细胞2×108/只,48 h后腹腔注射环磷酰胺50 mg/kg［1］. 30 h后检测外周血嵌合率为37.39%~47.26%，证实小鼠源性骨髓已在大鼠体内植活. 取上述嵌合体SD大鼠骨髓细胞,制成单细胞悬液,BALB/c小鼠肠道净化后接受9 Gy全身照射，随即经尾静脉输入上述嵌合体骨髓细胞4×107/只.
