研究青天葵活性部位的体外抗肿瘤作用(2)
2015-03-21 01:33
导读：2.2 MTT法 取对数生长期细胞以0.25%胰蛋白酶和0.02鞹A消化后，用培养液稀释。在96孔培养板中每孔加入200 μl（含有5 000个/ml肿瘤细胞）含10鸖的RPMI1640培养液，
2.2 MTT法
取对数生长期细胞以0.25%胰蛋白酶和0.02鞹A消化后，用培养液稀释。在96孔培养板中每孔加入200 μl（含有5 000个/ml肿瘤细胞）含10鸖的RPMI1640培养液，NG108-15细胞则用含10鸖的DMEM培养液，细胞置37℃，10%CO2培养24 h后，实验组分别加入最终浓度为15，30，60，120，240 μg/ml提取物的培养液，对照组则加入等体积溶剂的培养液，每组4孔，重复4次。置37℃，10%CO2培养5 d后，弃去上清液，加入200 μl/孔新鲜配置的含0.2 mg/ml MTT的无血清培养液，37℃继续培养4 h，弃上清液，加入200 μl DMSO，振荡混匀后，在酶标仪上以波长为550 nm，参比波长为450 nm测定OD值。
2.3 药物对肿瘤细胞生长的抑制率的计算方法［5］
肿瘤细胞生长抑制率（%）=［（1-实验组平均OD值）/对照组平均OD值］×100%
2.4 半数抑制浓度ⅠC50的计算
2.4.1 直线回归法［6］
当细胞生长抑制率与药物浓度有对数关系时，以各个不同药物的对数浓度为横坐标，相应的细胞生长抑制率为纵坐标，求出直线回归方程，根据该方程计算出IC50。
2.4.2 改良寇氏法［7］
当细胞生长抑制率与药物浓度不存在对数关系时，采用寇氏法计算IC50。药物IC50值的公式为：IC50=lg-1［Xm-i (∑p-0.5)］。式中Xm：设计的最大浓度的对数值；i：相邻两组浓度对数值之差；∑p：各组生长抑制率之和；0.5：经验常数。
3 结果
3.1 不同浓度提取物对白血病细胞株L1210的抑制结果见表1。石油醚部位和醋酸乙酯部位对白血病细胞株L1210都有直接抑制作用，抑制率与提取物浓度成正比。细胞生长抑制率与药液浓度无对数关系，故采用寇氏法计算IC50，IC50分别为83.5 μg/ml和76.2 μg/ml。正丁醇部位和甲醇部位对白血病细胞株L1210基本无活性。表1 受试样品对白血病细胞株L1210抑制的影响(略)
3.2 不同浓度提取物对白血病细胞株P388D1的抑制结果见表2。石油醚部位和
