尿毒症患者血清对小鼠骨髓红系祖细胞集落形成(2)
2015-04-17 01:01
导读：1.2 实验方法 1.2.1 标本采集与保存 实验组及对照组受试者均于清晨空腹抽取静脉血，室温静置30min后离心，分离血清，56℃加热灭活30min，-80℃冰箱保存备用
1.2 实验方法
1.2.1 标本采集与保存 实验组及对照组受试者均于清晨空腹抽取静脉血，室温静置30min后离心，分离血清，56℃加热灭活30min，-80℃冰箱保存备用。
1.2.2 小鼠骨髓细胞红系集落形成单位（CFU-E）、红系爆式形成单位（BFU-E）的培养 取8~10周Bal-c小鼠（均由
军事医学科学院实验动物研究所提供）。小鼠击头处死，75%酒精浸泡20min。立即无菌取出双侧骨髓，用IMDM培养液冲出全部骨髓细胞，台盼蓝染色进行细胞计数，并用IMDM培养液调整细胞密度为1×105/0.2ml（活细胞率＞95%）。
1.2.3 培养体系和条件 2.7%甲基纤维素，IMDM培养液，10-4mol/L巯基乙醇，15%小牛血清，3%谷氨酰胺，EPO（2u/0.2ml），CSF（50ng/ml），IL-3（10ng/ml）。将混匀的体系分别加到两个30mm培养皿中，加盖后放入37℃、饱和湿度的5%CO2培养箱内。培养第3天，联苯胺染色后倒置显微镜下计数含8个以上染色阳性的细胞集落为CFU-E。培养第7天，计数含50个以上染色阳性的细胞集落为BFU-E。
1.2.4 实验方法 将实验组、对照组血清分别用IMDM培养液稀释成终浓度为0（用等量培养液代替血清，作为阴性对照）、1.25%、2.5%、5.0%，观察两组不同浓度血清对小鼠骨髓CFU-E、BFU-E集落生长的影响。
1.3
统计学方法 所有数据均以均数±
