膀胱癌细胞凋亡与MDM2和P53基因表达的意义(2)
2015-04-17 01:01
导读：图1 P53阳性表达于肿瘤细胞核，呈棕黄色颗粒(SP×400)（略） 图2 MDM2阳性表达于细胞核呈棕黄色颗粒（SP×400）（略） 1.2.2 凋亡个数检测 细胞凋亡检测（末端
图1 P53阳性表达于肿瘤细胞核，呈棕黄色颗粒(SP×400)（略）
图2 MDM2阳性表达于细胞核呈棕黄色颗粒（SP×400）（略）
1.2.2 凋亡个数检测 细胞凋亡检测（末端脱氧核苷酸转移酶介导的xdUTP切口末端标记，terminal deoxynucleotide transferase mediated dUTPnick end labeling method,TUNEI法）试剂盒，DAB显色试剂盒购于福州迈新公司。步骤：切片脱蜡水化，3%H2O2清除内源性过氧化酶10 min，蒸馏水洗涤2 min共洗3次；加TBS1∶100蛋白酶K，37 ℃消化10 min，蒸馏水洗涤2 min共洗3次；每片加TDT和DIGdUTP各1 μl，标记缓冲液18 μl，4 ℃冰箱过夜，TBS洗2 min共洗3次；加封闭液50 μl，室温30 min；封闭液1∶100生物素化地高辛抗体50 μl，37 ℃反应30 min；TBS洗2 min共洗3次；加TBS1∶100稀释SABC，37 ℃反应30 min；TBS洗5 min共洗4次；DAB显色，苏木素衬染，脱水、透明、封片。实验中以不含TDT的试剂作阴性对照。结果判定：TUNEL法检测阳性表现为在肿瘤组织中散在分布胞核呈棕黄色颗粒着色的细胞(见图3)。在400倍光镜下，随机选择10个视野并计数1 000个肿瘤细胞，记录凋亡细胞数。计算细胞凋亡指数（AI），AI=（凋亡细胞数/1 000）×100%［1］。
图3 细胞凋亡阳性表现为肿瘤细胞核呈棕黄色颗粒（×400）（略）
1.3 统计方法 实验数据经SPSS统计软件包处理，数据以±s表示，采用t检验，方差分析，相关分析，cox多因数分析，以P＜0.05作为差异有显著意义的检验标准。
2 结果
2.1 检查 83例膀胱移行细胞癌中,有42例(50.6%) P53阳性,49例(59.03%) MDM2阳性，AI=1.433 5±0.386 3。
2.2 病理分级及临床分期中比较 MDM2Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ级间表达差异有显著性(P＜0.05)，Ⅰ级与Ⅱ级间表达差异无显著性(P＞0.05)；P53Ⅰ级与Ⅱ、Ⅲ级间表达差异有显著性(P＜0.05)，Ⅱ级、Ⅲ级间表达差异无显著性(P＞0.05)。MDM2在TaT1与T2T4间表达差异有显著性(P＜0.05）,P53在两组中表达差异无显著性(P＞0.05)。AI在Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ级间表达及TaT1与T2T4间表达差异有显著性(P＜0.01)。相关分析发现,MDM2阳性表达与病理分级及临床分期呈负相关(R=-0.263,P=0.016；R=-0.388,P=0.001);P53阳性表达与病理分级及临床分期呈正相关(R=0.492,P=0.001；R=0.341，P=0.002);MDM2、P53两种蛋白间表达无相关性；AI与MDM2呈负相关（R=-0.226,P=0.042）；AI与病理分级及临床分期呈正相关(R=0.642,P=0.000；R=0.455，P=0.000)；AI与P53无相关性。5 a随访AI及P53复发死亡组显著高于无复发组；MDM2复发死亡组显著低于无复发组。详见表1。
（科教范文网http://fw.nseac.com）
2.3 MDM2基因在P53基因阳性表达在膀胱癌中的表达 分析发现P53阳性表达合并MDM2阳性表达多见于分化好的膀胱癌Ⅰ级、Ⅱ级与Ⅲ级间表达差异有显著性(P＜0.05详见表2。
表1 Pgp、MDM2、P53表达与病理分级及临床分期的关系（略）
注：*P＜0.05**P＜0.01
表2 MDM2基因在P53基因阳性表达膀胱癌中的表达（略）
注：*P＜0.05
