种子蛋白电泳技术(2)
2013-07-12 01:31
导读：3聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 聚丙烯酰胺凝胶电泳是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍，分辨率最高的分析鉴定技术，
3聚丙烯酰胺凝胶电泳技术 聚丙烯酰胺凝胶电泳是生物化学和分子生物学中对蛋白质、多肽、核酸等生物大分子使用最普遍，分辨率最高的分析鉴定技术，是生化物质的最高纯度的标准分析鉴定方法，至今仍被人们称为是对生物大分子进行分析鉴定的最后、最准确的手段。种子蛋白电泳就是采用聚丙烯酰胺做为支持介质的电泳技术。
聚丙烯酰胺凝胶的孔径可以通过改变丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺的浓度来控制，可以随意控制胶浓度“T”和交联度“C”得到不同的有效孔径，用于分离不同分子量的生物大分子，大大增加了凝胶的分离范围。同时聚丙烯酰胺凝胶还具有化学惰性好不会出现“电渗”、电泳分离的重复性好、胶体透明度高易于拍照、强度好易于保存、无紫外吸收等优点，得到了广泛的应用目前尚无更好的支持介质能够取代它。
种子蛋白大多带正电荷，因而种子蛋白电泳过程中常采用酸性不连续性聚丙烯酰胺凝胶电泳（A-PAGE）的方法，让带电基团向正极泳动，通过凝胶的浓缩效应、电荷效应、分子筛效应，对蛋白进行分离。也可采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE），SDS-PAGE是在聚丙烯酰胺凝胶系统中引进SDS（十二烷基磺酸钠）， SDS是一种阴离子去垢剂，可与蛋白质结合，形成SDS -蛋白质复合物。由于SDS带有大量负电荷，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖，消除了蛋白质分子之间电荷差异。因此在电泳时，蛋白质分子的迁移速度则主要取决于蛋白质分子大小，此法常用于蛋白质分子量的测定。
对种子蛋白进行电泳分离主要目的是为了鉴别种子的真实性和品种纯度，具体方法可参考标准根据实际情况稍做改进。酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳中常采用甲酸盐缓冲体系和乳酸盐缓冲体系，分离胶的pH值在2.7-3.2之间，电极缓冲液的pH值在3.25-3.65之间，慢离子多为甘氨酸浓度在0.040~0.053 mol/L之间。至于凝胶浓度的确定，不同的贮藏蛋白分子量大小不同所需的凝胶孔径也有差异，应在实验中调整胶浓度大小通过电泳结果选择合适的浓度。
（科教范文网http://fw.NSEAC.com编辑发布） 品种纯度是农作物种子质量指标中最关键的一项，是对种子质量进行分级的唯一指标。随着草坪业的发展速度日益加快，草坪种子目前以成为世界仅次于禾谷类种子的第二大交易种子。为防止伪劣种子流入同时保护优良种质防止良种退化，维护育种家们的知识产权和权益等方面，无论是在农作物还是在草坪草都需要进行品种鉴定，种子蛋白电泳技术一直在品种鉴定工作中发挥这重要的作用，具有重要的意义。
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