雾化吸入布地奈德对肺纤维化大鼠肺组织MMP2、(2)

　　1.1  材料  清洁级健康雌性Wistar大鼠，体重180～200g左右（泸州医学院实验动物中心提供）；博莱霉素A5（天津太河制药有限公司）；布地奈德(阿斯利康制药有限公司，1 mg／支)。MMP2和TIMP2免疫组化试剂盒购自福州迈新生物技术开发有限公司；免抗鼠MMP2 多克隆抗体购自武汉博士德公司；兔抗鼠TIMP2 多克隆抗体购自武汉博士德公司。

　　1.2  肺纤维化模型的建立  Wistar大鼠45只，实验条件下饲养1周，随机分成布地奈德干预组（Bud组）、博莱霉素模型组（BLM组）和生理盐水空白对照组（NS组），每组15只。Bud组和BLM组大鼠用氯胺酮（100mg/Kg体重）麻醉后，在无菌操作下行气管切开，以两气管软骨环的间隙为穿刺点，朝向心端刺入气管，将含BLMA5(5mg／kg体重)的生理盐水0.2～0.3ml注入气管，旋转动物，使药液均匀分布在肺内。NS组大鼠同等条件下气管内灌注生理盐水。气管内灌注药物后，第0～6天每天雾化1次，Bud组给予布地奈德雾化吸入（ 0.5mg／kg体重)，NS组和BLM组在同等条件下雾化吸入等量生理盐水。第7、14、28天每组采用右室采血的方法各随机处死5只大鼠。

　　1.3  肺组织标本的留取和组织学分析  右心室采血处死动物后，经右心室注入4℃生理盐水冲洗双肺至肺脏呈苍白胶冻样，向左肺支气管内注入4％的多聚甲醛，将左肺组织放入4％的多聚甲醛中固定24小时。在不同部位取材3块，常规石蜡包埋，切片，行HE染色观察肺泡炎、行MASSON染色观察肺纤维化程度，参照文献［1］进行肺泡炎和肺纤维化程度评分。

　　1.4  肺组织MMP2和TIMP2免疫组化染色测定 免疫组化染色按照S睵试剂盒的说明操作，其中第一抗体分别为免抗鼠MMP2多克隆抗体（效价 1：100）和兔抗鼠TIMP2 多克隆抗体(效价1：100)，加入链霉菌抗生物素-过氧化物酶溶液后，用二氨基联苯胺(DAB)／H 2O2显色，常规脱水、透明、中性树脂封固。同时以PBS代替第一抗体，设立阴性对照实验。阳性表达为胞质内呈棕黄色颗粒改变。 （科教作文网http://zw.ΝsΕAc.Com编辑整理）
   
　　染色结果分析：以图文分析软件Image-Pro plus5.1采集肺组织免疫组化染色图像，随机取5个高倍视野(×400)，测量每个视野阳性染色的平均积分光密度值(IOD值)，以反映各组肺组织中MMP2及TIMP2表达的变化。

　　1.5  统计学分析  数据用均数±标准差(±s)表示，采用SPSS13.0统计软件进行统计学处理，样本均数的比较采用单因素方差分析和q检验，检验水准α=0.05，如果P＜0.05，则认为差异有统计学意义。

　　２  结果

　　２.１  肺组织病理学改变  NS组肺组织结构正常；BLM组第7天时表现为肺泡炎及肺间质炎症，第14天时肺泡炎仍较重，但肺间质开始出现纤维化改变，肺泡结构出现紊乱，第28天时肺间质广泛纤维化，肺泡结构难以分清。而Bud组第7、14 、28天的肺泡炎和肺纤维化程度与BLM组相比明显减轻。见表1和表2。

　　表1  布地奈德对肺纤维化大鼠肺泡炎症程度的影响（略）

　　注：*与NS组比较，P<0.05；Δ与BLM组比较，P<0.05

　　表2  布地奈德对肺纤维化大鼠肺纤维化程度的影响（略）

　　注：*与NS组比较，P<0.05；Δ与BLM组比较，P<0.05