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某种低聚木糖的毒性试验研究

2014-09-30 01:39 某种低聚木糖的毒性试验研究 低聚木糖在低聚糖中占有重要的地位，首先它的有效服用量在众多低聚糖中是非常低的，就双岐杆菌增殖作用而言，它的有效摄入量为0.7g/人·日，为低聚异麦芽糖的1/20，低聚果糖的1/10，低聚半乳糖的1/7；低聚木糖在我国的研究开发是近几年刚刚兴起的［2］，我们对其中一种具有润肠通便作用的低聚木糖片进行了毒理学安全性评价。结果表明该产品的小鼠急性毒性实验为无毒物质，Ames实验，小鼠骨髓嗜多染红细胞微核实验，小鼠精子畸形实验为无遗传毒性作用，大鼠30天喂养试验表明，各实验组动物生长发育良好，各项指标均在本室正常值范围内，与对照组之间差异均无显著性，病理组织学检查亦未见异常。说明该样品对大鼠各项观察指标未产生明显毒性作用，食用该产品是安全可靠的。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 低聚木糖片 由某生物科技有限公司提供。

1.1.2 实验动物 清洁级昆明种小鼠和清洁级Wistar大鼠由中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心提供，合格证号SCXK-（军）2002-001。

1.1.3 Ames实验菌株 由山东医学科学院劳动卫生与职业病研究所提供。

1.2 方法［1］

1.2.1 小鼠急性毒性试验 选择小鼠20只，雌雄各10只，体重为18～22g。剂量为10g/kg.bw，灌胃给予受试物，灌胃量为0.2ml/10g.bw。观察14天，记录动物中毒表现及死亡情况。

1.2.2 Ames试验 试验菌株为经鉴定符合要求的鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102，体外活化系统为多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆制备的S-9混合液。根据毒性测定结果，试验设立200、500、1000、2500、5000μg/皿5个剂量，同时设立自发回变组、溶剂对照组和阳性对照组。试验按照平板掺入法在加S-9与不加S-9混合液的条件下进行，每个组别设3个平皿。若受试物的回变菌落数为自发回变菌落数的2倍以上，并具有剂量—反应关系则判定为阳性。整套试验在相同条件下重复做两次。

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1.2.3 小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验 选择体重25～30g小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。3个实验组中受试物剂量分别为2.5、5.0、10.0g/kg.bw，另设蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组（40mg/kg.bw）。灌胃给予受试物，共两次，间隔24h，末次给予受试物后6h处死动物，常规制片。每只动物镜检1000个嗜多染红细胞，记录微核细胞数，计算微核率（以千分率表示）。

1.2.4 小鼠精子畸形试验 选择体重25～30g雄性小鼠25只，随机分为5组。每组5只。3个实验组中受试物剂量分别为2.5、5.0、10.0g/kg.bw，另设蒸馏水阴性对照组和环磷酰胺阳性对照组（40mg/kg.bw）灌胃给予受试物，连续5天，首次灌胃后第35天处死动物，常规制片。每只动物计数1000个结构完整的精子，记录畸变类型和数量，计算精子畸形率（以百分率表示）。

1.2.5 大鼠30天喂养试验

1.2.5.1 试验方法 选用体重60～80g断乳大鼠80只，随机分为4组，每组20只，雌雄各半。根据人体推荐量设立3个实验组，受试物剂量分别为0.65、1.30、2.60g/kg.bw（分别相当人推荐量的25、50、100倍），将受试物按照动物体重的10%计算食物摄入量掺入饲料中给予实验动物，即0.65%，1.30%，2.60% （质量分数）。对照组喂饲基础饲料。单笼喂养，自由饮食，每周称重，记录饲料加入量、剩余量，连续观察30天。第30天禁食16h，第31天处死动物，取血进行血常规及血生化测定。

1.2.5.2 观察指标 (1)动物的一般表现、体重、食物利用率。(2)血常规及生化指标：血红蛋白、红细胞计数、白细胞总数及其分类、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白等。(3)病理解剖：脏器系数、大体观察及病理组织检查（肝、肾、脾、胃及十二指肠，睾丸或卵巢）。