反相高效液相色谱法测定巴洛沙星有关物质的方(2)

2014-10-19 01:03

导读：1.2 实验溶液的制备供试品溶液：取巴洛沙星（批号：20041024）约10.2mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；中间体溶液：取羧酸乙酯

1.2 实验溶液的制备供试品溶液：取巴洛沙星（批号：20041024）约10.2mg，置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；中间体溶液：取羧酸乙酯14.0mg、螯合物Ⅰ11.3mg、螯合物Ⅱ10.3mg，分别置100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；混合溶液：取供试品溶液及各中间体溶液各1份，混合，即得。

图1 巴洛沙星及中间体的结构式
Fig. 1 Structural formula of balofloxacin and intermediates
1-巴洛沙星；2-羧酸乙酯；3-螯合物Ⅰ；4-螯合物Ⅱ1.3 色谱条件色谱柱：SMT C18柱（5μm，4.6mm×250mm）；流动相：乙腈-0.4%十二烷基硫酸钠溶液(47：53)［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］；检测波长：295nm；流速：1.0ml/min；柱温：室温；进样量：20μl。

2 结果与讨论

2.1 测定波长的选择分别称取巴洛沙星及各中间体适量，分别加乙腈溶解制成每1ml中约含6μg的溶液，照分光光度法(中国药典2000年版二部附录ⅣA)，在200～400nm的波长处扫描，结果显示巴洛沙星在295nm处吸收最强，且其他中间体在295nm附近有较大的吸收，故选择295nm为本品有关物质测定的检测波长。

2.2 色谱柱及流动相的选择色谱柱：(1)DiamonsilTM C18柱（5μm， 4.6mm×200mm）；(2)Kromasil C18柱（5μm， 4.6mm×200mm）；(3)SMT C18柱（5μm， 4.6mm×250mm）。流动相：(1)参照中国药典2000年版二部沙星类药物有关物质测定，采用流动相：乙腈-0.05mol/L枸橼酸溶液(20： 80)［用三乙胺调pH值至3.5］；(2)乙腈—0.4%十二烷基硫酸钠溶液（47：53）［用枸橼酸（1.5mol/L）调pH值至3.0］。

采用上述不同的色谱柱和流动相进行实验，结果表明：采用色谱柱(1)或(2)及流动相(1)，虽然主峰出峰时间适中且峰形较好，但各中间体在此流动相中50min都未见出峰；采用色谱柱(1)或(2)及流动相(2)，样品及各中间体出峰时间适中，但峰拖尾严重；采用色谱柱(3)及流动相(2)，样品及各中间体出峰时间适中，且峰形较好。所以选择采用色谱柱(3)及流动相(2)来检测本品的有关物质。

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2.3 系统适用性试验取1.2项溶液各20μl分别注入液相色谱仪进行测定，并记录色谱图，测定结果见表1及图2。试验结果表明：巴洛沙星与各中间体在上述色谱条件下能有效地分离。

表1 巴洛沙星与中间体液相色谱保留时间
Tab.1 Chromatograms retention time of balofloxacin and related substances

图2 巴洛沙星有关物质系统适用性试验HPLC图
Fig. 2 Chromatograms obtained from the system applicability test of related substances in balofloxacin
1-螯合物Ⅰ；2-羧酸乙酯；3-螯合物Ⅱ；4-巴洛沙星