探讨薄层扫描测定蛇床子素含量的优点-职称论文

蛇床子为伞形科植物蛇床［Cnidium monnieri(L)Cuss.］的干燥成熟果实，具有温肾壮阳、燥湿、祛风杀虫之功效［1］，中医主要用来治疗外阴湿疹、瘙痒、滴虫性阴道炎、急性渗出性皮肤病等病症。蛇床子主产于河北、山东、江苏、浙江、4川等地，分布遍及全国各地，其主要有效成分为数种香豆素类化合物，其中蛇床子素是主要活性成分，含量最高，约占0.8%左右，约占总香豆素的60%［2］。蛇床子素（甲基欧芹酚Osthole, Ost）分子式为C15H16O3，化学名称为7–甲氧基–8–异戊烯基香豆素，分子量244.29。蛇床子素有降压作用［3］，心脏抑制作用［4］，促学习记忆作用［5］，性激素样作用［6～8］，调节骨代谢 ［9, 10］，增强免疫力等作用［10］。蛇床子素具有很高的临床应用价值，本实验以薄层扫描法为测定其含量的方法优选了提取工艺从而为其在临床上的应用做好了前期的工作。

    1  材料与方法

    1.1  药品与仪器

    1.1.1  药品  中药蛇床子，产地河北，购于张家口市华佗药房；蛇床子素标准品购于南京青泽绿生植物有限公司；石油醚,乙醇,甲醇,乙酸乙酯均为分析纯；CMC-Na硅胶G板（市售，10cm×5cm）。

    1.1.2  仪器  WFH-203B型3用紫外分析仪(上海精科实业有限公司);KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;KH-3000型薄层色谱扫描仪（上海科哲生化科技有限公司）;SP-Ⅱ型薄层电动点样器（上海科哲生化科技有限公司）;RE-52AA型旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）。

    1.2  方法

    1.2.1  供试品的制备

    回流提取：称取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下加热回流360min，趁热抽滤，得滤液Ⅰ。重复上1步得滤液Ⅱ、Ⅲ。合并3次滤液在旋转蒸发器中75℃恒温蒸馏。蒸发至少量液体后，用95%乙醇定容至100mL。1mL溶液相当于0.5g的蛇床子。作为供试品溶液1。

    索氏提取：称取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下恒温索氏提取600min，直至提取器中的乙醇液澄清，制备滤液。蒸馏，乙醇定容，使其每1mL溶液相当于0.5g的蛇床子。作为供试品溶液2。

    超声波提取：称取50.0g蛇床子加８倍量95%乙醇（g/v），75℃下超声提取40min［11］ 制备滤液。蒸馏，乙醇定容后的滤液作为供试品溶液3。

    1.2.2  对照品溶液的制备

    阳性对照品溶液:精密称取蛇床子素标准品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混匀,每1mL溶液相当于5.1mg的蛇床子素标准品。

    阴性对照品溶液:精密称取大黄素标准品10.2mg，用95%的乙醇溶解后定容至2mL，混匀，每1mL溶液相当于5.1mg的大黄素标准品。

    1.2.3  薄层及扫描条件

    蛇床子素标准品在薄层板上点样后于200～400nm处进行光谱扫描，在322nm处有1个较大吸收峰，在370nm处1个小吸收峰。为减少误差采用双波长反射法锯齿扫描，λS=322nm,λR=370nm，SX=3。采用外标两点法定量。    以石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2为展开剂在CMC-Na硅胶G板上上行展开。1.2.4  点样及展开  用薄层电动点样器按照“对照品2μL，供试品2μL，对照品4μL”  图1  紫外灯下观察结果 (1、3标准品溶液；2供试品溶液）顺序点于同1硅胶G板上，上行展开25min，晾干后置于365nm紫外灯下观察，用直尺对蛇床子素的荧光斑点定位。同法用大黄素（不含蛇床子素）做阴性对照。

    2  结果

    在本实验条件下，样品中的蛇床子素与蛇床子素标准品的荧光斑点重心在同1直线上,斑点圆润、清晰无拖尾现象,主斑点与其他斑点分离较好（见图1）。蛇床子素标准品的Rf值为 0.49±0.04（n=9）。

    3种提取方法得到的蛇床子中蛇床子素的含量结果见表1。表1  不同方法提取蛇床子中蛇床子素含量比较（略 ）

    3  讨论

    蛇床子素用展开剂系统Ⅰ(石油醚∶乙酸乙酯=15∶2)［12］，在紫外灯下观察发现样品中的成分尚未分离开，依次考察了展开剂系统Ⅱ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶1)，系统Ⅲ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=14∶2∶1)，系统Ⅳ(石油醚∶乙酸乙酯∶甲醇=15∶2∶2)。结果为系统Ⅳ展开蛇床子素结果最理想，无拖尾现象。

    定量分析包括①洗脱测定法：试样经展开分离后，将该组分的斑点连吸附剂1齐刮下或取下，然后将该组分从吸附剂上洗脱下来，收集洗脱液，进行定量测定，测定的方法1般采用分光光度法或比色法。②直接测定法：试样经色谱分离后，在薄板上对斑点进行直接测定。薄层扫描法定量测定速度快，准确度好，误差范围1般在±2%～±5%内操作简单，误差小。

    本实验粗略地比较了3种提取方法，结果表明同1温度下超声波提取法的提取率最高。从实际来看，此实验仅为实验室提取蛇床子素的初步工作，在此基础上可优选出更好的提取条件，为蛇床子素在药理方面的研究做好前期工作。【参考文献】 （科教作文网http://zw.nseAc.com）
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5 沈丽霞,张丹参,张力,等.蛇床子素对学习记忆的影响及其机制分析［J］.药学学报,1999,34(6):405-409

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7 秦路平,张汉明,张卫平,等.蛇床子素和蛇床子总香豆素对肾阳虚大鼠血清甲状腺和促甲状腺激素的影响［J］.中国中西医结合杂志,1996,16(9):552-553

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9 王建华,宋东梅,刘楠,等.蛇床子素对大鼠成骨细胞增殖分化的影响［J］.天然产物研究和开发,2004,16(1):59-61

10 张巧艳,秦路平,田野萍,等.蛇床子素对新生大鼠颅钙骨成骨功能的调节作用［J］.中国药理学通报,2003,19(4):384-38