高效液相色谱法测定百癣夏塔热胶囊中没食子酸

摘要：目的高效液相色谱法测定复方苦参洗剂中苦参碱的含量。方法采用ODSC18柱（5μm,4.6mm×200mm），流动相为乙腈0.1%磷酸（5.5∶94.5），检测波长为210nm，流速为1.0ml・min1，柱温：室温。结果苦参碱在0.39～2.60μg范围内线性关系良好(r=0.9991)，方法的回收率为96.32%，RSD为1.16%(n=5)。结论该方法能准确可靠地进行苦参碱的含量测定，能够有效地控制该制剂的质量。

关键词：复方苦参洗剂；苦参碱；高效液相色谱法

DeterminationofMatrineinFufangKushenLotionbyHPLC

Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminingmatrineinFufangKushenLotionbyHPLC.Method

sKromasilC18

column(5μm，4.6mm×200mm)wasused.Themobilephaseconsistedofacetonitrile0.1%phosphoricacid（5.5∶94.5）withflowrate1.0ml・min1.Thedetectionwavelengthwassetat210nm.Thecolumntemperaturewasroomtemperature.Results

Thelinearrangeof

matrinewasattherangeof0.39～2.60μg(r=0.9991).Theaveragerecoverywas96.32%andRSDwas1.16%(n=5).ConclusionThemethodisrapid,highlyaccurateandprecise.ItcancontrolthequalityofFufangKushen

Lotion.

Keywords:FufangKushenLotion;Matrine;HPLC

复方苦参洗剂由苦参、蛇床子、花椒、地肤子、白鲜皮等8味药材组成，其中苦参为君药，其中主要含有生物碱成分，而以苦参碱和氧化苦参碱含量最高，对于其含量测定方法以薄层扫描为主，但其操作复杂。高效液相色谱法也有报道，但是主要以氨基柱为多，也有采用离子对色谱进行测定，对各种色谱条件经过重复性实验，均不能对本品含量进行有效的测定。本文最终以高效液相色谱法［1］，采用常用的C18柱成功地建立了适合本制剂的含量测定方法，制定出合理的含量限度。经过方法学考察及3批样品测定，测定方法提取完全性、重现性、精密度良好，回收率符合要求，整个实验过程可操作性强，能够客观地控制本品的质量。

1仪器与试药

1.1仪器Waters600E高效液相色谱仪，Waters600泵，Waters2487紫外检测器，millog色谱工作站。

1.2试剂与试药苦参碱对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：805-200206），乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为双蒸水，复方苦参洗剂样品为自制。

2方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性色谱柱KromosilODSC18（5μm，4.6mm×200mm）,乙腈0.1%磷酸（5.5∶94.5）为流动相，检测波长为210nm，柱温：室温。在此条件下，样品得到良好分离。缺苦参阴性对照在苦参碱峰处无峰出现，不干扰本品的测定。

2.2标准曲线与线性范围取苦参碱对照品，加甲醇制成每毫升含0.13mg的溶液，作为对照品溶液。分别精密吸取对照品溶液3，5，10，15，20μl，按上述色谱条件注入色谱仪，测定峰面积,以峰面积对苦参碱进样量回归,计算的回归方程为：A=1409106.046C＋97272.17,相关系数r=0.9991,苦参碱在0.39～2.60μg范围内与峰面积呈良好线性关系。

2.3精密度实验精密吸取样品溶液10μl，连续进样5次，记录峰面积，结果峰面积的RSD0.70%，表明本方法精密度良好。

2.4重复性实验称取本品5份，依供试品制备方法制取样品，依法测定含量，结果5份样品的含量分别为0.32，0.33，0.32，0.31，0.33mg・ml1，平均含量为0.32mg・ml-1，RSD为2.59%，结果表明本方法重复性良好。

2.5稳定性实验取样品，按供试品制备方法制备样品，分别于0，4，8h测定面积，结果面积的RSD为1.64%，表明本品在8h内稳定性良好。

2.6回收率实验采取加样回收法，取1定量已知含量的样品（C=0.32mg・ml-1），加适量对照品，依法制备供试品溶液，测定含量，计算回收率。结果见表1。结果表明，本方法回收率良好。

表1苦参碱加样回收率实验结果序（略）

2.7样品测定取本品10ml，置于分液漏斗中，加适量水稀释，用氨试液调节pH9～10，加氯仿提取5次（15ml×3，10ml×2），合并氯仿液，蒸干，残渣用氯仿溶解并定容至25ml量瓶中，摇匀，滤过，精密量取续滤液5ml，通过中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径1cm)，依次以氯仿、氯仿甲醇(7∶3)各20ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇适量使溶解，并转移至10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。依上述色谱条件测定。结果见表2。

表2复方苦参洗剂测定结果批（略）

3讨论

在本实验色谱条件下，苦参碱得到良好分离，但是氧化苦参碱不能得到有效分离，经过多方实验，也未能得到理想效果，因此，没有对其进行含量测定。实验中发现苦参碱含量与原药材比较偏高，可能因为处方中蛇床子含有的还原性成分的影响，使氧化苦参碱转变为苦参碱的缘故。本实验色谱条件中流动相pH接近2，在1般色谱柱适用范围下限。因此，实验结束后应立即用水冲洗色谱柱。

参考文献：

［1］王慕邹.常用中草药高效液相色谱分析［M］.北京:科学出版社,1999:207.

(1.陕西中医学院，陕西咸阳712046；2.陕西中医学院2003级研究生，陕西咸阳712046)