壁虎醇提物对小鼠肾包膜下移植S180肉瘤的抑制作(2)

　　2.3 药物毒性观察以小鼠被处死前的体重(FBW) 与给药前的体重(IBW) 之比值作为判定药物对荷瘤小鼠毒性的指标。FBW/IBW≥0.80, 则认为所测药物毒性较小。

　　2.4 壁虎醇提物对荷瘤小鼠免疫器官的影响 按上述方法给药6 d后，处死动物取胸腺，脾脏称重。胸腺指数=胸腺重/体质量，脾脏指数=脾脏重/体质量。

　　2.5 小鼠S180肉瘤组织病理学变化肿瘤组织用10%中性甲醛固定,石蜡包埋切片,常规HE染色,光镜观察肉瘤组织病理变化。

　　2.6 VEGF蛋白表达的检测用SABC免疫组化法,操作步骤按照试剂盒说明书进行。VEGF判定与分析：凡细胞浆、细胞膜出现棕黄色颗粒或均质样棕黄色结构者为VEGF免疫反应阳性细胞。免疫组化染色评分标准是：根据着色细胞的比例(染色范围)及染色强度，染色范围(阳性细胞比率)分为0～4级，阴性为0分;阳性细胞1%～25%为1分;25%～50%为2分;51%～75%为3分;76%～100%为4分。染色强度划分为0～3级,阴性为0分;弱阳性为1分;中等强度为2分;强阳性为3分;两者得分相加为最后得分。

　　2.7 统计方法运用SPSS 统计软件，采用单测t检验。

　　3 结果

　　3.1 壁虎醇提物对荷瘤小鼠S180移植瘤的抑制作用及毒性反应环磷酰胺组、壁虎醇提物高、低组抑瘤率分别为74.5%，77.5%，57.5%，与模型组比较有统计学差异(P<0.01)，且毒性反应小。结果见表1表1 各组对小鼠S180肉瘤的抑制作用

　　3.2 壁虎醇提物对荷瘤小鼠免疫器官的影响 CTX组与对照组相比，胸腺指数与脾脏指数明显降低(P<0.05),壁虎醇提物各剂量组与对照组相比无明显差异，结果见表2表2 各组对荷瘤小鼠免疫功能的影响　　3.3 移植瘤组织病理学变化经HE染色后先在低倍镜下观察，然后在高倍镜下(400×)观察,阴性对照组癌细胞大小和形态不一致,细胞染色较深,癌细胞核体积增大,细胞核和细胞浆比例增大，核的大小、形状、染色不一，核染色深。核染色质呈粗颗粒状，分布不均匀，核仁大，数目增多，核分裂相增多，可见不对称性、多极性及顿挫性等病理性核分裂相，且癌组织间微血管丰富;环磷酰胺组有大片的细胞坏死区，壁虎各组均可见不同程度的片状坏死区，瘤组织内及其周围微血管均减少。

　　3.4 壁虎对小鼠移植S180肉瘤组织VEGF蛋白表达的影响免疫组化结果显示VEGF蛋白在S180肉瘤组织中呈高表达，主要表达于细胞的胞浆和包膜，环磷酰胺组、壁虎醇提物组对VEGF的表达有明显的抑制。结果见表3及图1表3 各组小鼠S180肉瘤组织VEGF蛋白表达

　　4 讨论

　　从中药中筛选有效的抗肿瘤药物已成为国际上发现抗肿瘤药物的重要途径，不仅经济，疗效可靠，还可以为设计更为理想的新药提供新的化学结构，成为创制新药的先导化合物。壁虎是中国传统的中药材，具有攻毒疗疮、散结止疼、活血化淤的功效，目前尚未被《中国药典》收入，壁虎在临床被广泛地用于治疗多种疾病，对肿瘤特别是食管癌，胃癌，肝癌等实体瘤具有独特的疗效[4，5]。本实验组提取的壁虎醇提物能显著的抑制小鼠肾包膜下移植S180肉瘤的生长，壁虎醇提物高、低剂量组抑瘤率可达到77.5% ，57.5%。研究同时本研究又对壁虎高、低剂量组的胸腺指数和脾脏指数与对照组进行比较，结果显示无明显差异，而CTX组与对照组比较下降明显。并且由FBW/IBW 结果显示壁虎醇提物的毒性小。为探讨壁虎醇提物抑制肿瘤生长的机制，我们进一步研究其对血管生成的影响。肿瘤组织内血管形成是受机体内促血管生成细胞因子和抑制血管内皮细胞因子相互作用的结果，VEGF是体内促进血管生成的主要的细胞因子[6]。在肿瘤的血管生成过程中，VEGF不仅促进已经存在的血管系统的内皮细胞的生长，迁移和存活，而且还动员骨髓内的内皮祖细胞释放入外周血，抑制VEGF可以降低肿瘤内微血管的生成[7，8]。本实验组进行了VEGF蛋白表达的检测，结果表明与阴性对照组比，环磷酰胺组、壁虎醇提物组VEGF蛋白表达均降低。可见壁虎醇提物抗肿瘤机制并不是通过增加机体的免疫力起作用，其机制可能与降低了VEGF蛋白的表达有关。

　　图1 各组小鼠S180肉瘤组织VEGF蛋白表达(400×)