γ-谷氨酰转肽酶酶学性质的研究论文(2)

　　以TE pH8.0为缓冲液，不同温度下保存20 min，测定酶活力[1]。

　　1.5酶对pH的耐受性

　　pH2.0采用Na2HP04柠檬酸缓冲液; pH4.0、pH5.0采用NaAc-HAc缓冲液;pH7.0采用磷酸盐缓冲液;pH8.0、pH9.0采用Tris-HCl缓冲液;pH110、pH13.0采用甘氨酸-NaOH缓冲液;在25 ℃下保存30 min，测定酶活力。

　　1.6酶的最适反应温度

　　以TE pH8.0为缓冲液，分别在不同温度下测定酶活力。

　　1.7酶的最适反应pH

　　pH2.0采用Na2HP04-柠檬酸缓冲液; pH4.0、pH5.0采用NaAc-HAc缓冲液;pH7.0采用磷酸盐缓冲液;pH8.0、pH9.0采用Tris-HCl缓冲液;pH110、pH13.0采用甘氨酸-NaOH缓冲液，采用酶活测试方法检测酶活力。

　　1.8金属离子对酶活力的影响

　　在反应体系中分别加入各种金属离子，终浓度均为5 mmol/L，采用酶活测试方法检测酶活力。

　　2结果

　　2.1酶对温度的耐受性

　　γ-GTP对40 ℃及以上温度的耐受性较差，当温度达到50 ℃时，经过短时间的保存,酶活力基本丧失。但在25~35℃的温度范围有较好的稳定性，特别是在常温下，经过20 min的保藏，酶活力基本未变。因此该酶的保藏条件比较简单，适合工业生产茶氨酸。见图1。[PSc1781;S*2〗图1γ-谷氨酰转肽酶对温度的耐受性Figure 1Temperature tolerance of γ-GTP

　　2.2酶对pH的耐受性

　　γ-GTP对酸性环境的耐受性很差，在pH低于5.0时，短时间保存后酶活力基本丧失，而在碱性条件下，最高可以耐受pH11.0的环境而保持较高的酶活力。其中pH8.0是其最佳的保藏pH。因此可以选用pH8.0的缓冲液保存该酶。见图2。　　[PSc1782;S*2〗图2γ-谷氨酰转肽酶对pH的耐受性Figure 2Tolerance to pH of γ-GTP

　　2.3酶的最适反应温度

　　γ-GTP对温度的适应性很强，在37~55℃以下均具有较高的酶活力，其中在45 ℃时酶活力最高。因此可以确定按照γ-GTP酶活力检测方法得到γ-GTP的最适反应温度为45 ℃。见图3。

　　2.4酶的最适反应pH值