HPLC法测定独子藤中雷公藤红素的含量论(2)

　　色谱柱：Supelco Discovery C18柱(25 cm×4.6 mm，5 μm);流动相：甲醇-体积分数5%H3PO4水溶液(体积比80∶20);流速：1.0 mL·min-1;检测波长：426 nm;柱温：25 ℃;进样量：20 μL。色谱图见图1。

　　2.2对照品贮备液的制备

　　精密称取雷公藤红素对照品5.0 mg，置25 mL容量瓶中，加适量甲醇溶解并定容，摇匀，得到质量浓度为0.20 mg·mL-1的雷公藤红素对照品贮备液。

　　2.3供试品溶液的制备

　　取独子藤药材适量，粉碎过40目筛，精密称取10.0 g，装入100 mL带塞三角瓶中，加入三氯甲烷超声提取3次，每次50 mL，每次30 min。静置，滤取上清液，旋转蒸发仪上浓缩至干。称取4.0 g硅胶装柱(1.5 cm×10 cm)，以三氯甲烷1 mL超声溶解样品，上样。先以三氯甲烷50 mL进行洗脱，弃去洗脱液，再用三氯甲烷-甲醇(体积比95∶5)100 mL洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，旋转蒸发仪上浓缩至干。残渣用甲醇溶解并定容于50 mL容量瓶中，045 μm微孔滤膜滤过。平行操作5份，作为1~5号供试品溶液。[PSd041;S*2〗A.对照品; B.供试品图1雷公藤红素的HPLC色谱图Figure 1HPLC chromatograms of reference

　　2.4线性关系的考察

　　分别精密吸取“2.2”项下对照品贮备液1、2、3、4、5 mL置于5 mL容量瓶中，分别用甲醇溶解并定容，摇匀，制得系列对照品溶液。依次取上述溶液各20 μL进样，依法测定。以雷公藤红素的峰面积积分值(A)为纵坐标，质量浓度(ρ)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为A=5.5886×103ρ-2.0127×104(r=0.999 1)。结果表明，雷公藤红素在40~200 μg·mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系。

　　2.5精密度试验

　　精密吸取同一雷公藤红素对照品溶液20 μL，连续进样6次，测得雷公藤红素的峰面积RSD为196%，结果表明仪器精密度良好。

　　2.6稳定性试验

　　取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样，依法测定，结果雷公藤红素峰面积的RSD为298%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

　　2.7重复性试验

　　取同一批次的独子藤药材，称取5份，按“2.3”项下方法处理并进样测定，结果雷公藤红素峰面积的RSD为2.59%，表明本方法重复性良好。

　　2.8加样回收率试验