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研究贫铀植入后不同时相点对大鼠肾脏的损伤效

2014-02-12 01:01 摘要： 目的 研究贫铀植入后不同时相点对大鼠肾脏的损伤效应。方法 采用初成年健康雄性Wistar大鼠分别植入贫铀片，观察大鼠接触贫铀后3、6、12、18月其肾脏超微结构和病理形态学改变,肾功能检测和胶原染色，并采用免疫荧光和蛋白印记杂交检测肾脏不同时间段纤维化相关因子TGF-β 1与Smad表达。结果 植入贫铀后不同时间段大鼠肾脏出现不同程度的病理改变，表现为肾小球固缩、后继肾小管萎缩和局部肾间质纤维组织增生以及炎性细胞浸润。纤维化程度随接触时间延长而加重。胶原染色显示胶原分布主要位于肾小管周围，且具有区域性。TGF-β 1与Smad是肾脏组织纤维化进程中重要的细胞因子。Western Blot分析显示贫铀接触后大鼠肾脏中TGF-β 1与Smad均有不同程度的增加。结论 贫铀长时间植入后大鼠肾脏可出现病理学及超微结构的改变，TGF-β 1与Smad参予了其纤维化进程。

关键词： 贫铀 肾脏 纤维化 毒性

贫铀(Depleted Uranium，DU)是铀原料经浓缩提取235U以后所产生的副产品，因其235U含量低于天然铀故而得名。目前DU合金被广泛应用于各类民用和军事项目。贫铀既具有放射毒性，又具有化学毒性，由于其高传能线密度，特定组织器官蓄积以及半衰期长的特点，人员因嵌入、吸入或食入贫铀后，会对人体产生严重损害作用。损害作用与接触的剂量、时间以及接触者的年龄、性别、体质、饮食等有关［１］。肾脏是铀的主要蓄积器官和排泄器官，进入机体的铀绝大部分进入肾脏并通过尿液排出体外，因此，肾脏在铀对机体的毒性危害中占重要地位。铀染毒后可引起典型的急性肾功能衰竭。肾脏纤维化与慢性肾功能衰竭的进展关系十分密切，几乎所有的慢性进行性肾脏疾病都是肾纤维化破坏过程的结果。因此，本研究拟通过大鼠长期低剂量接触贫铀，检测肾脏功能，肾脏的超微结构和组织病理形态学观察，胶原染色，Western Blot分析以及免疫组化检测。研究贫铀对大鼠肾脏可能存在的损伤效应，以TGF-β 1为代表的组织纤维化相关细胞因子在肾纤维化进程中所起的作用，对贫铀可能引起的肾脏损伤及其机理进行初步研究。 （科教作文网http://zw.NSEaC.com编辑发布）
1 材料与方法
1.1 DU植入模型的建立
采用初成年雄性Wistar大鼠，体质量为150～200 g，20只，右后肢贫铀片植入，DU片组成、大小及植入方法见文献［2］。对照组大鼠20只，除植入物为与贫铀片相同体积的塑料片外，其他与植入组相同。本研究所采用大鼠均由第三军医大学大坪医院动物研究所提供。
1.2 病理组织学与超微结构观察
在大鼠植入贫铀3、6、12和18个月后，处死大鼠，取肾脏组织分别用多聚甲醛及2％戊二醛溶液固定后包埋，进行病理形态学和超微结构观察。
1.3 大鼠肾功能检测
检测大鼠血液中尿素(UREA)、肌酐(CREA)以及Na＋、K＋、Cl-等离子的浓度。
1.4 胶原含量分析
肾组织石蜡切片，苦味酸Sirus Red染色：切片脱蜡至水，蒸馏水洗 2 次，苦味酸Sirus Red染液浸染,苏木素复染，盐酸酒精溶液分化，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。
1.5 TGF-β 1和Smad的Western－Blot蛋白印迹分析 剪取肾组织约100 mg，加入组织裂解液，提取肾组织总蛋白，并进行蛋白浓度测定。SDS-PAGE电泳，PVDF膜半干式转印，封闭液4℃浸泡过夜。分别以1∶200稀释的一抗、1∶500稀释的辣根过氧化物酶标记的相应二抗孵育。DAB显色，凝胶成像分析系统分析处理。
1.6 TGF-β 1和Smad的免疫组化染色
按照博士德免疫组化试剂盒操作说明进行。
1.7 统计学处理
数据分析采用Microsoft Excel和Spss软件进行统计学处理。
2 结果
2.1 病理组织学与超微结构观察
植入组大鼠肾脏在贫铀接触 3 个月后可见部分肾小球纤维化，肾小管萎缩或扩张；6个月后表现出不同程度的肾小球固缩硬化，部分肾小球则代偿性肥大，肾包膜部分皱褶；12个月后，见灶性多个肾小球萎缩，在皮髓交界处肾单位破坏严重，可见囊状坏死软化灶及炎细胞浸润，间质纤维化，部分残留肾单位肥大。18个月后可见肾实质灶性纤维化，部分肾小球肥大，间质少量炎细胞浸润。