仔猪水肿病的诊治论文(2)

2.3 小鼠攻毒试验 取血琼脂上溶血菌落用生理盐水溶解，测得其浓度为16亿/ml，用生理盐水稀释为1.6亿/ml供攻毒试验用。实验组小鼠三只，每只腹腔注射0.1ml菌液，对照组三只，每只腹腔注射0.1/ml生理盐水，观察7d，取死亡小鼠的肝脏和脾脏涂片染色镜检，并涂布于普通营养琼脂，血琼脂和麦康凯琼脂平板上，37℃培养24h[7]。

2.4 菌种增殖 取麦康凯上呈红色和典型的溶血菌落，接种于普通琼脂斜面37℃培养18-24h，4℃冰箱保存，作为一级种子备用。

2.5 药敏试验 用灭菌棉试子沾取待检细菌6h培养物，均匀地涂布在营养琼脂平板上，然后夹取各种药物纸片，按一定间隔贴放到琼脂培养基的表面，置37.8℃温箱内，培养18h，观察抑菌圈直径大小。

2.6 灭活苗的制备

2.6.1 抗原液的制备 生理盐水菌液组 取一级种子接种于普通琼脂平板中，37℃培养18-24h，用灭菌生理盐水洗下菌苔并混合。

营养肉汤菌液组 取一级种子分别接种于营养肉汤中，37.8℃培养18-24h，做纯度检验。

2.6.2 纯度检验和活菌计数 抗原液制备完成后，取样用普通琼脂做纯度检验，同时进行活菌计数。

2.6.3 灭活 抗原液按量加入0.3%甲醛溶液，于37.8℃振荡培养箱中培养48h。

2.7 疫苗的检验

2.7.1性状检查

生理盐水菌液组 疫苗静止后，下层有少许沉淀，上层为半透明液体，摇动后沉淀悬浮，呈均质白色混悬液。

营养肉汤菌液组 疫苗呈棕黄色半透明液体。

2.7.2无菌检验 随机抽检样品，分别接种于普通营养琼脂斜面，鲜血琼脂板