论麦芽醇对AD大鼠空间记忆障碍的影响
2015-01-20 01:44
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摘要： 目的 探讨麦芽醇对AlCl3致阿尔茨海默病（AD）大鼠的影响。方法 采用AlCl3灌胃制作AD大鼠模型，Morris 水迷宫检测大鼠空间记忆能力，免疫印迹检测tau蛋白磷酸化水平。结果 麦芽醇明显缩短大鼠寻找平台的时间，降低tau蛋白磷酸化水平。结论 麦芽醇能有效改善因AlCl3所致的大鼠空间记忆障碍，其机制可能与抑制tau蛋白过度磷酸化有关。
关键词： 麦芽醇；阿尔茨海默病；空间记忆；tau蛋白
麦芽醇是从小麦、大豆等的水解液中提取的单体化合物，其在体内外可与自由基结合，抑制膜脂质过氧化反应[1,2]，在阿尔茨海默病（alzheimer’s disease，AD）中的作用未见报道。AD是老年人常见的一种慢性进行性神经退行性疾病,目前针对AD的药物治疗效果不明显。由于AD的发病原因及机制没有完全清楚，研究开发出真正具有预防或治疗作用的药物将有广阔的前景和深远的意义。本实验拟观察麦芽醇对三氯化铝（AlCl3）诱导的AD模型大鼠的影响。
1 材料和方法
1.1 实验动物和分组
成年健康雄性SD大鼠60只，体质量200～250g，华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。随机分为对照组（Con）、AD模型组(AD)、麦芽醇组(maltol，MT)，每组10只。
1.2 造模与用药
AD模型组、麦芽醇组每日上午给予AlCl3（200mg/kg）灌胃，1次/d，连续9周；麦芽醇组自AlCl3灌胃第7d开始，除上午给予AlCl3外，每日下午给予麦芽醇10mg/kg灌胃，1次/d，连续8周，以上参照文献[3]。
1.3 Morris 水迷宫检测
造模结束后进行Morris 水迷宫检测。测试用圆形水池直径120cm，高60cm；圆柱形有机玻璃平台直径10cm，高40cm，平台的顶端平面低于水池液面2cm。室温及水温均保持在（26±2）℃，水以奶粉搅浑，整个背景均为乳白色，以避免老鼠用视觉搜寻平台。大鼠在训练前放入水池自由游泳120s，使其熟悉环境。训练时将大鼠从任一象限1/2弧度处头面向池壁轻放于水中，其游泳图像经水面上方1.5m处的摄像机拍摄并连接于路径追踪系统采集，通过微机分析，可提供潜伏期（即老鼠从入水点找到平台所用时间）、路径、搜索策略等指标，本实验选用潜伏期和游泳路径衡量大鼠学习和记忆成绩。每只大鼠每天在4个象限各训练1次，每次游泳时间限为120s，若在120s内未找到平台者系统自动停止记录，潜伏期记为120s，由测试者引导其上台，休息30s后进行下一次训练。采用的实验策略为每组大鼠于第8周末开始连续训练7d，以大鼠第7d训练的成绩作为测试成绩，训练时间每天固定在2∶00pm 到8∶00pm。将各组所得的成绩作比较，可反映大鼠空间记忆保留情况。
（科教论文网 Lw.nsEAc.com编辑整理） 1.4 免疫印迹检测
水迷宫测试后立即将大鼠颈椎脱臼断头处死，随后行海马样品制备、蛋白浓度测定、SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳以及转移电泳，最后进行化学发光法显影, 其过程大致如下: 0.1%TTBS 洗PVDF膜，5%脱脂奶粉封闭2h，1∶200兔多克隆R134d、PS396一抗(Santa Cruz Biotech, Inc.)4 ℃孵育过夜; 0.1 % TTBS 洗膜, 1∶200 稀释的HRP 抗兔二抗室温孵育1 h,0.1%TTBS 洗, 15min ×4 次,最后在暗室中进行化学发光法显影，高敏感胶片摄片、洗片。
1.5 统计学分析
所有描述性数据用平均数±标准差 (±s)表示，统计学分析应用统计软件SPSS10.0中方差分析，P
