SiRNA稳定抑制肝癌细胞hTERT基因的表达论(2)
2015-04-26 01:04
导读：shRNA发夹结构序列长度为69 bp，两端分别为BamHⅠ, HindⅢ酶切位点，中间为9 bp茎环序列分隔的反向重复靶序列，并以6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子. 质粒
shRNA发夹结构序列长度为69 bp，两端分别为BamHⅠ, HindⅢ酶切位点，中间为9 bp茎环序列分隔的反向重复靶序列，并以6个T作为RNA聚合酶Ⅲ的转录终止子. 质粒构建采用BamHⅠ, HindⅢ双酶切空质粒pGenesil1，将shRNAhTERT转录模板5′AAGTTCCTGCACTGGCTGATG3′（AF 015950 nucleotides 16821702）和阴性对照转录模板5′AAGCTTCATAAGGCGCATAGC3′ （与人基因无同源性）分别设计成发夹结构，定向克隆至该载体上，经筛选、酶切鉴定后，进行测序确定，命名为pGenesilshRNAhTERT，阴性对照命名为pGenesilshRNAPK. 质粒转染与G418筛选采用LipofectamineTM2000脂质体转染法. 操作按说
