PI-103对多药耐药白血病细胞体外作用的研究(2)
2015-06-16 01:07
导读：1.3流式细胞术测定细胞内阿霉素浓度：将0.2M的PI-103和/或2g/ml阿霉素与终浓度为1105/ml的细胞共同孵育24小时，收集1～5105个细胞，1000rpm离心5min，弃上清。加
1.3流式细胞术测定细胞内阿霉素浓度：将0.2μM的PI-103和/或2μg/ml阿霉素与终浓度为1×105/ml的细胞共同孵育24小时，收集1～5×105个细胞，1000rpm离心5min，弃上清。加入适量冷PBS，细胞重悬，1000rpm离心5min，重复2次。以冷PBS重悬细胞，上机行流式细胞检测。流式检测激发波长488nm，接收波长575nm。细胞内阿霉素浓度高低以荧光强度为计量单位。
1.4
统计学处理 采用t检验，所有数据经SPSS11.5统计软件分析。
2 结果
2.1 PI-103对敏感和耐药细胞株的生长抑制作用相同
我们用MTT法检测了不同浓度PI-103对K562及K562/A02细胞增殖的抑制作用。0.5-5μM的PI-103处理24h后，两种细胞均呈现出明显的细胞生长受抑。而且，细胞的生长抑制呈现出剂量依赖性。此外，在相同浓度的PI-103作用下，两种细胞株的生长抑制率基本相同，差异无统计学意义（P>0.05)。
2.2 PI-103能增加白血病细胞株对阿霉素的敏感性，但仅有叠加作用
为进一步了解PI-103与阿霉素是否具有协同抑制白血病细胞增殖作用，我们用0.2μM PI-103与不同浓度阿霉素联合作用于K562细胞及K562/A02细胞，以MTT法观察了药物联用对两细胞的生长抑制效果。结果显示，0.2μM PI-103对K562及K562/A02细胞的抑制率分别为10.5%和16.4%，加用PI-103后，阿霉素对K562细胞的抑制率有所增加，但单用阿霉素组的生长抑制曲线与联用PI-103组的生长抑制曲线几乎平行，说明PI-103联用阿霉素仅有叠加作用，而无协调作用。同样，在K562/A02组，但单用阿霉素组的生长抑制曲线与联用PI-103组的生长抑制曲线几乎平行。说明PI-103联用阿霉素对K562/A02细胞生长抑制作用也仅有叠加作用，而无协同作用。
本文来自中国科教评价网
2.3 PI-103能增加耐药细胞株细胞内阿霉素的浓度
为明确PI-103增加细胞对阿霉素敏感性的机制，本实验采用用流式细胞术检测了细胞内阿霉素的浓度。
结果显示，在K562组，未用PI-103时，细胞内阿霉素荧光强度为87.46±3.46，PI-103处理后，细胞内荧光强度升高为107.31±6.13，差异具有统计学意义（P=0.015）。而在K562/A02组，PI-103使细胞内阿霉素荧光强度由79.09±2.97升高至165.94±6.58，差异具有显著统计学意义（P=0.000）。结果显示PI-103能显著增加细胞内阿霉素的浓度，尤其是在耐药K562/A02细胞中更明显。
3 讨论
PI3K/AKT/mTOR信号转导途径是细胞生存和增殖的重要途径，在白血病多药耐药的形成机制中也发挥了重要作用。因而，通过抑制PI3K途径诱导细胞凋亡达到治疗白血病尤其是耐药白血病的目的是一个较好的治疗思路[5]。本研究结果显示，双向抑制剂PI-103能显著抑制白血病细胞的增殖，且不受耐药细胞表型的影响，在耐药细胞及不耐药细胞中发挥同样的抑制生长作用。PI3K/AKT/mTOR信号转导途径抑制剂是一种有良好应用前景的药物。
本研究发现，在Pgp高表达的细胞株K562/A02中，PI-103能明显提高细胞内阿霉素的浓度，其增加量明显高于敏感株K562。其机制可能是由于Pgp的合成受抑制导致的。Tazzari等报道[6]，多药耐药蛋白P170的表达是受PI3K/AKT/mTOR信号调控的。Pgp合成减少导致阿霉素被“泵”出减少，细胞内阿霉素浓度提高，从而在一定程度上逆转白血病细胞的耐药。
由PI-103能提高细胞内阿霉素浓度这一结果，作者推论PI-103与阿霉素有联用有协同作用。但令作者感到意外的是，本结果显示，二者联用仅有叠加作用，而无协同作用。这可能与下列原因有关：首先，可能与实验方法的选择有关。本实验采用MTT法研究药物作用后细胞的增殖，结果显示，在2μg/ml阿霉素作用下，K562/A02细胞生长显著被抑制。然而，K562/A02细胞是长期用含2μg/ml的培养基中生长的，
