疏肝活血法对下肢缺血模型大鼠血管内皮祖细胞(2)

　　21各组不同时间点外周血AST、CK、LDH、HBDH水平比较表1~表4结果显示：假手术组各项酶学指标在不同时间点差异无显著性意义(P>005);中药组和模型组术前与假手术组比较差异无显著性意义(P>005)。术后各时间点模型组各项酶学指标水平均较假手术组显著升高(P<005)，术后第3、7天,中药组各项酶学指标水平较模型组及术后第1天均显著下降(P<005)。

　　22各组不同时间点外周血CD34+、VEGFR2+比例比较表5结果表明：假手术组各时间点及各组术前的CD34+、VEGFR2+ 双荧光阳性细胞比例比较差异均无显著性意义(P>005)。术后不同时间点模型组CD34+、VEGFR2+比例较假手术组均显著增加(P<005)。术后第1天,中药组和模型组间比较差异无显著性意义(P>005);术后第3天,中药组出现上升高峰,术后第7天,中药组仍维持较高水平,与模型组比较差异均有显著性意义(P<005或P<001)。1各组不同时间点外周血AST水平比较表2各组不同时点外周血CK水平比表4各组不同时点外周血HBDH水平比较表5各组不同时间点外周血CD34+、VEGFR+2比例比较

　　3讨论

　　31酶学对于反映肢体缺血的意义正常情况下,外周血中CK、LDH、AST、HBDH等酶活性远比组织中的低。当创伤等原因引起机体局部组织缺血缺氧时,无氧酵解导致大量酸性产物堆积,细胞内pH值下降,加重代谢紊乱和供能不足;同时应激反应导致氧自由基的释放,可发生膜脂质过氧化反应,产生一系列脂类过氧化物,直接或间接地作用于细胞各种成分,改变生物膜的结构和功能,使得细胞钠泵功能下降,钙离子通透性增加,造成细胞及线粒体水肿,线粒体内酶释放入胞质,使细胞膜通透性增高,加速细胞内酶入血,引起血清酶学异常,进而加重对缺血组织的损伤[6-7]。故酶学的变化可非特异性地反映组织缺血的严重程度及恢复情况。在本实验中,模型大鼠早期因下肢缺血而出现酶学指标的异常升高,但在后期由于下肢血供的部分改善,酶学指标可呈下降趋势,中药组较模型组下降明显,提示疏肝活血法中药对组织的血供改善有一定的作用。

　　32血管内皮祖细胞对于改善缺血的作用EPC是成熟血管内皮细胞的前体细胞,既可不断增殖,又能定向分化为成熟的内皮细胞,与成熟内皮细胞相比具有迟发性高增殖潜能。EPC与造血干细胞来源于同一祖细胞,在出生后的机体内,EPC同造血干细胞一样定居于骨髓,缺血等因素可以动员EPC从骨髓释放,并在外周循环中运行,刺激邻近的内皮细胞分化及增殖,并直接作用于缺血区域来促进血管新生与血管功能的恢复,从而加快新生血管的形成。基于此,在20世纪末有学者提出了治疗血管新生的概念：即通过应用血管生长因子或其基因,促进缺血组织的血管新生和侧枝血管形成,使缺血得到改善的新的治疗方法[8-9]。

　　在血管新生的复杂过程中,原始的刺激因素是缺血,同时也需要多种促血管生成因子的共同参与,才能使血管新生得到良好的调控。目前认为,血管生成促进因子包括VEGF、肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF) 等,其中VEGF是人体内最强的促血管形成因子。VEGF作为血管内皮细胞特异性的有丝分裂原和趋化因子,无论在胚胎发育过程中还是在出生后血管新生中均发挥重要调控作用[10]。Kalka等[11]在VEGF转基因治疗肢体缺血的研究中发现随着VEGF表达水平的增加,外周血内皮祖细胞增加了30倍,证明了VEGF对骨髓源性内皮祖细胞有很强的动员作用。论文代写

　　CD34是造血干细胞的主要表面标志之一，VEGFR2是血管系统最早出现的细胞标记,也是鉴定EPC的分子标志之一[12]。胚胎干细胞来源的VEGFR2阳性细胞可以分化形成血管内皮细胞和血管结构[13],提示其中含有EPC。外周血中存在EPC,同时表达CD34和VEGFR2细胞表面标志的前体细胞,经培养后可表达成熟内皮细胞的表面标志,所以认为同时表达CD34和VEGFR2表面标志的前体细胞可代表EPC的变化水平[14]。

　　本研究结果显示,CD34+、VEGFR+2双荧光阳性细胞在术后第1天开始升高,于术后第3天时出现峰值,尤其中药组升高的程度较模型组更显著,说明组织缺血是EPC释放的有力刺激,而疏肝活血中药对于EPC的释放具有增强效应。这也不难理解，