引言 传统的分离和纯化生物产物的方法很多，大(2)
2013-07-16 01:12
导读：2.1 亲和超滤技术和传统的亲和层析技术的比较 亲和层析[7]（Affinity Chromatography）是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标
2.1 亲和超滤技术和传统的亲和层析技术的比较
亲和层析[7]（Affinity Chromatography）是利用偶联亲和配基的亲和吸附介质为固定相亲和吸附目标产物，使目标产物得到分离纯化的方法。它具有很高的选择和分离性能以及较大的载量，只需要一步处理即可使待分离的生物大分子从复杂的混合物中分离出来，达到千倍以上的纯化，并保持较高的活性[8]，是分离纯化以及分析生物大分子尤其是蛋白质的有力工具。
与传统的亲和层析技术相比，亲和超滤在全混搅拌池中进行，全部起始物料同时参与亲和载体结合，对可溶性载体或超细颗粒载体，反应能在瞬间达到平衡。由于可溶性载体配基与目标蛋白结合的空间位阻小，配基能较为有效地发挥作用，因而吸附容量大，能在短时间内处理大体积物料。当物料比较稀，体积比较大时，采用亲和超滤比亲和层析更为合适。当被纯化产物浓度高，体积小时，采用亲和层析更为合适。
但亲和层析常有如下问题[9] ：(1)层析柱易于阻塞和污染，使用寿命短；(2) 受基质限制， 柱效降低；(3)在层析过程中，底物被吸附和洗脱的过程缓慢，分离周期延长； (4) 某些配基与底物可存在多点的相互作用，这可能会造成峰分裂和不可逆吸附现象等。
2.2 亲和超滤技术和传统的超滤技术的比较
传统的超滤过程是以压力为推动力，溶质按分子量大小不同而分离，比膜孔小的溶质和溶剂（水）一起透过膜，而较大的溶质则被截留。这是一个非常简单的过程，不包括相变化，不需要加入化学试剂，而且能耗小，易于大规模操作。如孙瑜等[10]用超滤法纯化大黄多糖；夏光辉[11]将超滤技术应用于葡萄酒加工；刘春霞[12]等用超滤技术处理饮用水。但刘春霞等也指出：超滤技术选择性差，不能将分子量相近的生物大分子分开。而亲和超滤技术可以很好解决这一难题，亲和配基（配体）能特异性的与目标产物相结合，与待分离物质分离。
（科教作文网http://zw.NSEaC.com编辑发布） 3 亲和超滤技术的应用
亲和超滤技术可从稀溶液中专一地提纯生物大分子。过程中不需要为了分离目标物而引入新的化学杂质和苛刻的操作条件，亲和载体与目标产物具有很好的生物及化学相容性，可避免产品的生物活性受到损伤。亲和作用在均相或微粒-液相体系中进行，吸附与洗脱扩散阻力小，所有亲和载体同时参加吸附或洗脱过程，载体利用率和过程速率大为提高，可实现大规模连续化操作。目前，亲和超滤技术已经在蛋白质分离、酶分离、手性拆分等领域获得了广泛的应用。
3.1 亲和超滤在蛋白质分离方面的应用
蛋白质是生命的物质基础，它是与生命及与各种形式的生命活动紧密联系在一起的物质。纯蛋白在食品，医药，化妆品等行业有着极其重要的作用。
Mattiason 等[13]利用热杀死酵母细胞为载体，细胞表面存在的糖为配基，从刀豆中提取伴刀豆蛋白，用分子截留值30 万-100 万的超滤膜过滤，以葡萄糖为洗脱剂，最后得到纯产品，收率为70%以上。Power 等[14]将生物素共价结合到平均粒径为74nm 脂质体上，制成亲和载体用于从含有溶菌酶和细胞色素C 的模拟杂质中分离抗生素蛋白，回收率为50%。
Rao 等[15]使用蓝色染料为亲和配基，再生纤维素膜共价结合一个磺酸基从而形成带负电的过滤膜，通过两者之间的静电相互作用来分离牛血清白蛋白和卵蛋白。结果表明牛血清白蛋白纯化了90 多倍，收率大于90％。并指出，使用小的带电亲和配体可提高蛋白质分离的潜力。
3.2 亲和超滤在酶分离的应用
通常酶也是蛋白质，但酶又不完全等同于蛋白质，有着自己独特的性质。酶的催化作用有如下特性：高效性、专一性、多样性、温和性。因此，酶的分离纯化工艺往往更加苛刻。
（转载自中国科教评价网http://www.nseac.com） Male 等[16]采用在无氧的条件下，经N-丙烯酰-间- 氨基苯甲脒和丙烯酰胺共聚而成的聚合物作为大分子配体，采用亲和超滤技术从人尿液中分离纯化尿激酶。整个亲和超滤过程尿激酶的收率为49 % ，所得的尿激酶的比活力接近于最高商品级。由于人尿液中还含有其它分子量很高的组分，因此需要在亲和超滤分离纯化尿激酶前，需要对其进行预处理[17]。
