引言 传统的分离和纯化生物产物的方法很多，大(3)
2013-07-16 01:12
导读：Teke 等[18]用亲和超滤技术分离纯化牛胰磷脂酶A2 (PLA2)。这种方法是基于壳聚糖-磷脂酰乙醇胺的合成树脂为亲和载体，在Ca2+存在条件下进行亲和超滤，最后
Teke 等[18]用亲和超滤技术分离纯化牛胰磷脂酶A2 (PLA2)。这种方法是基于壳聚糖-磷脂酰乙醇胺的合成树脂为亲和载体，在Ca2+存在条件下进行亲和超滤，最后以EDTA 为洗脱剂，结果显示该酶被纯化79 倍，活性回收率为76.3％。
Luong 等[19]采用与Male 实验用的相同大分子为配体，与提取液中的胰蛋白酶相互作用形成复合物，然后使用连续亲和超滤技术，使胰蛋白酶-大分子配体复合物被截留而其它杂质则通过膜，用精氨酸或氨基苯甲脒对复合物进行洗提，从复合物中分离出胰蛋白酶。连续亲和超滤技术从猪胰腺中分离纯化胰蛋白酶的产率高，所得产品纯度高。而Powers 等则采用改性脂质体作为大分子配体，以亲和超滤技术来分离和纯化胰蛋白酶。
Mukherjee 等[20]考察了聚醚膜和聚乙烯膜两种不同的膜来分离纯化胰蛋白酶的能力，比较了两种膜（截留分子量均为30 kDa）的相对性能。研究表明：两种膜在提取胰蛋白酶活性相近（聚醚膜为74％，聚乙烯膜为70％）的前提下，使用聚醚膜的总蛋白回收率（70％）是聚乙烯膜（46％）的的1.5 倍。在亲和超滤的洗涤和洗脱阶段，聚醚膜均比聚乙烯膜有利于持续进行蛋白质分离。
Vedajnananda[21]等进行了半连续-亲和超滤分离纯化胰蛋白酶的
数学模拟。实验使用再生纤维素膜（截留分子量：30 kDa）为超滤膜，大豆胰蛋白酶抑制剂为亲和配体，从胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶的混合物中分离纯化胰蛋白酶。实验中二者的浓度为0.02 毫克/毫升，浓度比例一直维持在50:1，超滤的压力在199.4-395.5 千帕范围。结果：在160 秒内，胰蛋白酶的浓度从超滤模拟系统中它的初始值下降至零，而胰凝乳蛋白酶的浓度下降到零则用了300 秒。从而证明了使用半连续-亲和超滤分离纯化胰蛋白酶的可行性。
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3.3 亲和超滤在手性拆分方面的应用
许多有机化合物分子都有“对映异构体”，即具有“手性”。如α-氨基酸，在碳连接有一个羧基、一个氨基、一个烃基和一个氢原子（或一个不同于前边的烃基）。由于对映体之间理化性质的相近，分离和合成出纯净的对映体一直是人类梦昧以求的事业。目前亲和超滤技术分离手性化合物的研究中以氨基酸的研究居多。
Poncet 等和Garnier 等[22]都采用牛血清蛋白作为大分子配体来拆分色氨酸消旋体，当溶液的pH 值为9 时，采用单级亲和超滤技术分离出的D - 色氨酸的纯度为91 % ， 整个过程拆分回收率为89 %。而Romero 等[23 ]采用相同的大分子配体来拆分色氨酸消旋体，采用二级亲和超滤技术，则可使分离出的L - 色氨酸的纯度大于90 % ，整个过程的回收率为60 %，并指出采用二级亲和超滤技术可以有效的避免截留滞留物(复合物) 的累计，因此可获得更高的提纯倍数。
Overdevest 等[24]采用具有对映选择性的胶束作为大分子配体，通过亲和超滤技术来拆分苯丙氨酸消旋体。在该过程中，具有对映选择性的胶束优先与一种对映异构体结合而形成复合物，而未结合的对映异构体则通过超滤膜。
倾斜超滤技术可以连续不断的去除滤饼， Iritani 等[25]使用亲和倾斜超滤技术分离色氨酸对映体：以牛血清蛋白为立体选择性配基，使用垂直放置的单通模式的中空纤维膜为超滤膜，在pH 值7 的条件下进行分离。结果表明：右旋色氨酸优先和牛血清白蛋白结合，过滤速度与牛血清白蛋白的浓度相关，但并未受到浓缩物流速的影响，因为堆积于膜上的滤饼即使在很低的流速下也可以在重力的作用下被移除。
Romero[26]采用模拟系统分析亲和作用力受溶液的pH 值和盐的浓度的影响。实验以牛血清白蛋白为亲和配基来分离的D -和L -色氨酸对映体， 结果表明L -色氨酸和牛血清白蛋白的最大结合度是在pH 值为7 至10，在这个PH 范围之类纯化度显着增加。
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4 展望
亲和超滤技术作为一种新兴的分离纯化技术，具有亲和层析和膜过滤的优点，不仅利用了生物分子的识别功能，而且操作简单、易于放大，是现代分离工程的一项重要技术。对亲和超滤进行的一系列研究结果表明，亲和超滤技术具有较大的实际应用价值。另外，虽然亲和过滤在分离纯化酶和蛋白质等生物大分子方面的优越性很多，但是其应用领域仍然不够，特别是国内的此方面分离科学研究，目前几乎未见相关报道，亟待引起重视和发展。此外，亲和超滤技术本身还有诸多疑难点，如减少非特异性吸附，载体的反复利用后的污染等问题尚待解决，相信随着亲和过滤技术的不断完善，在不远的将来会走上工业化应用之路。
