引言 葛根富含葛根淀粉和总黄酮（含量约为1-1(2)

　　此外，通入氧气还可减少因厌氧发酵造成的恶臭。

　　2.2 培养基质对葛根黄酮含量的影响

2.2.1 辅料碳氮源对葛根黄酮含量影响

菌种生长有一周期，需要营养底物；如果营养不足，会导致菌种生长所需的能量、碳氮源等成分不足影响生长，减缓纤维素等植物组织分解减缓，阻碍葛根黄酮溶出；但如果营养过剩，又会使菌种提早达到衰亡期，使葛根黄酮溶出受抑制。从图4 可知，辅料豆粕加入量与葛根黄酮的含量关系呈曲线走势，3.5g 葛渣，加入豆粕量为1.0g 时，葛根黄酮的含量最大为0.986 ug/ml。

　　2.2.2 不同接种量及对葛根黄酮含量的影响

设定黑曲霉接种量为原料的20%、30%、40%、50%、60%的比例加入原料中。由图5可知，接种量为50%即菌液量为1.75ml 时，葛根黄酮的含量最高，为0.529 ug/ml。原因在于菌种含量对葛根黄酮溶出的影响主要表现在如加入的菌种太多，当营养不足时，会加剧菌种之间的竞争，导致太多菌种提前死亡；加入的菌种太少会因营养过剩，还未与植物组织完全发生酶促反应前，便提前达到生长旺盛期顶点，随之衰亡，凋零。

　　2.2.3 不同发酵温度及对葛根黄酮含量的影响

酶类属于蛋白质类物质，其对温度大都非常敏感。适宜的温度不仅可以加快微生物的生长和繁殖，还可以增大酶活性，促进植物纤维的降解。由图6 可以看出，发酵温度对葛根黄酮影响很大，在温度为30°C 时，葛根黄酮含量最高为1.4719 ug/ml。

　　2.2.4 不同pH 值及对葛根黄酮含量的影响

体系环境的酸碱性也会影响菌种的生长。由图7 可以看出，当体系的pH 值为5 时，黑曲霉生长最适应，葛根黄酮其浓度能达到最大值，为346.63 ug/ml。

　　2.3 超声波萃取葛根黄酮产品

2.3.1 最佳单因素条件的复合实验

通过单因素探讨，确立出生物酶化法提取葛根黄酮的最佳实验条件；取葛渣3.5ｇ，选定各最优单因素条件，进行最优单因素的复合实验，经高效液相色谱法分析，谱图如图8（a）；测得葛根黄酮浓度为37.688ug/ml，葛根黄酮含量明显高于任一单因素所得值；对照标品的液相色谱图图8（b），其峰型与出峰世界时间相似；此外，样品谱图在9 分钟前还存在其他峰，说明采用生物酶促反应，还可以得到葛渣其他活性成分。

　　2.3.2 超声波协助生物酶化反应提高产品含量

为充分提高葛根黄酮产率，在获得生物酶化反应的最佳工艺条件基础上，分别选用3.5克葛渣，通过提取产品量，考察超声波协同作用。其结果见表1。从图9 可知，生物酶化反应获得葛根黄酮为1.446mg/g,而超声波协同生物酶化反应获得葛根黄酮为2.974 mg/g，含量明显高于其他两种反应，葛根黄酮含量结果表明超声空化作用有助于破坏细胞膜，促进黄酮类化合物释放与溶出,且超声波的不断震荡和热效应,不仅有助于溶质扩散,同时对原料起水浴作用。

　　3 结论

（1）从生物多样性出发，采用生物酶促反应有助于葛渣中葛根黄酮溶出，并经超声波协同处理葛根废渣后，葛根黄酮含量较单一处理的产物高。

　（2）从微生物发酵过程中影响因素出发，选用黑曲霉菌种，最优发酵工艺条件为：菌种接种量为50%，固液比为1：20，葛根渣与辅料之比为7：2，发酵温度30℃，发酵时间60h，pH 值为5，能得到葛根黄酮浓度为37.688ug/ml，葛根黄酮含量为每克葛渣含葛根黄酮1.446mg/g；超声波处理能得到2.974 mg/g。

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