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| 全部作者： | 张齐 范健 石欣 孔波 肖志 杨正平 |
| 第1作者单位： | 东南大学附属中大医院普外科 江苏南京 210009 |
| 摘要： | 目的 构建CDC25B3基因RNAi慢病毒载体。方法 针对已经筛选确定的CDC25B3基因RNAi有效靶序列，合成靶序列的Oligo DNA，退火形成双链DNA，与经Hpa I 和Xho I酶切后的pGCL-GFP载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV-shCDC25B3慢病毒载体，PCR筛选阳性克隆，测序鉴定。用LV-shCDC25B3，pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒共转染包装细胞293T细胞，包装产生慢病毒，以293T细胞GFP蛋白的表达水平测定病毒滴度。结果 PCR和测序证实，成功构建CDC25B3shRNA的慢病毒载体LV-shCDC25B3。结论 成功构建人CDC25B3基因RNAi慢病毒载体。 |
| 关键词： | RNA干扰；CDC25B；胰腺癌；慢病毒 远程下载 (免费PDF全文) |
| 发表日期： | 2007年02月03日 |
| 同行评议： | 先进性：CDC25B在肿瘤中已有不少研究，但在胰腺癌中研究较少，有1定的先进性。CDC25B的RNAi已有文章报道（2004年），本文独立设计构建CDC25B3的RNAi亦可。 技术路线和结果：是较为成熟的技术路线，基本上没有问题。但有1点存在1些疑问：在RNAi转染对CDC25B蛋白表达抑制的效果时，采用与CDC25B载体共转染293细胞。这样，CDC25B转染的效率会影响效果的判断，同时，CDC25B载体为CMV强启动子PcDNA载体，会高表达转染的CDC25B，但设计的RNAi仍能高效的抑制CDC25B。 在此步中，如采用稳定转染CDC25B的293细胞，或者结构性表达CDC25B的细胞为靶细胞，就不存在以上问题。 评论：本利用pGL－GFP载体构建CDC25B基因RNAi慢病毒载体，经筛选有效的RNAi靶序列后，成功载体连接、转染和病毒包装、产毒，经酶切、PCR和测序鉴定构建成功。设计合理，技术路线可行。构建的载体可用于CDC25B基因功能研究，具有1定的实用性和先进性。 |
| 综合评价： |
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| 注：同行评议是由特聘的同行专家给出的评审意见，综合评价是综合专家对各要素的评议得出的数值，以1至5颗星显示。 | |