| 论文首页哲学论文经济论文法学论文教育论文文学论文历史论文理学论文工学论文医学论文管理论文艺术论文 |
| 全部作者： | 胡静 戚孟春 邹淑娟 李继华 周海孝 |
| 第1作者单位： | 4川大学华西口腔医学院 |
| 摘要： | 目的 本研究旨在通过基因重组策略体外构建重组质粒pEGFP-BMP7，并检测其在大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）中的表达。方法 应用RT-PCR方法从大鼠肾脏中分离、扩增目的基因片段，并进行测序；随后将所得cDNA定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1中，进行双酶切来鉴定克隆的正确性。通过脂质体介导重组pEGFP-BMP7瞬时转染大鼠骨髓MSCs，确定转染效率；并通过RT-PCR、免疫细胞化学手段检测BMP7的表达。结果 通过RT-PCR成功获得了11.3kbp的cDNA片段；该cDNA除756bp处有1碱基从T突变成A外，其余序列与大鼠BMP7基因完全相符。重组质粒双酶切图谱显示，BMP7 cDNA被正确插入到载体中。绿色荧光蛋白（GFP）在大鼠MSCs中早期瞬时转染效率可达33%。转染后RT-PCR和免疫细胞化学检测证实了重组pEGFP-BMP7在大鼠MSCs中的表达。 结论 本研究成功构建了重组真核表达质粒pEGFP-BMP7，并在大鼠骨髓MSCs中得到表达。该策略有助于应用BMP7行基因治疗，促进DO骨痂形成和修复颅颌面骨缺损。 |
| 关键词： | 骨形成蛋白7；基因克隆；基因转染；间充质干细胞；绿色荧光蛋白 远程下载 (免费PDF全文) |
| 发表日期： | 2005年11月22日 |
| 同行评议： | 该研究为进行下1步应用pEGFP-BMP7重组质粒进行更高表达及骨向分化打下基础。建议作者观察33％阻性表达的骨髓间充质干细胞的转归是否有促进其骨向分化的作用。 |
| 综合评价： |
|
| 修改稿： | |
| 注：同行评议是由特聘的同行专家给出的评审意见，综合评价是综合专家对各要素的评议得出的数值，以1至5颗星显示。 | |