阿米卡星对豚鼠耳蜗毛细胞的损伤作用(3)

　　连续给药后，在各刺激频率下，AMK 3 d组豚鼠的ABR阈移与对照组比较均无显著性差异(P>0.05);AMK 7 d和11 d组豚鼠的ABR阈移与对照组比较均有显著性差异 (P<0.01)，并且随着AMK给药时间的延长，ABR阈移亦明显增大(P<0.01)(图2)。注：▲与对照组比较P<0.01，*与AMK 3 d组比较P<0.01，△与AMK 7 d组比较P<0.01

　　3 讨 论

　　F-actin是一种耳蜗毛细胞骨架蛋白，具有收缩及固定静纤毛、使OHC运动、保持毛细胞形状以及支持和传导等多种作用[5]。TRITC标记的鬼笔环肽是一种特殊的F-actin标记物，因此可以用于识别耳蜗毛细胞，判断其形态变化。我们采用耳蜗基底膜铺片，观察到经TRITC标记的鬼笔环肽染色呈现红色荧光，主要定位在OHC和IHC的静纤毛、表皮板，并且在Deiters等支持细胞也有F-actin的表达。这与以往学者的观察结果相一致[6]。

　　在体和离体实验表明，AmAn引起的耳蜗毛细胞损害总是从耳蜗底回开始并逐渐向顶回发展，并且OHC的损伤要先于IHC [7]。本实验观察到，AMK首先损伤耳蜗底回的OHC，并且随着给药时间延长，OHC损伤从底回向顶回延伸，OHC缺失数量逐渐增多，而IHC的损伤要远轻于OHC，符合AmAn耳毒性的损伤规律。丁大连等[7]125-131将bodipy标记的庆大霉素投放到耳蜗器官培养系统，观察到OHC摄取庆大霉素的能力强于IHC，底回OHC摄取庆大霉素的能力强于顶回OHC。因此，豚鼠耳蜗顶回和底回对AMK的敏感性不同，可能与耳蜗顶回和底回OHC对AMK的摄取能力不同有关。

　　巴云鹏等[8]报道，豚鼠连续注射AMK 3 d之内，听力损伤不明显，而连续用药6 d后，与用药前相比ABR阈值则有显著的变化。我们观察到的结果与巴云鹏等的研究结果基本一致。本实验连续注射AMK 3 d后，ABR阈移较对照组无明显变化(P>0.05);而连续注射AMK 7 d后，ABR阈移明显增大，并且在连续注射11 d后，ABR阈移达到最大，与形态学损伤相平行;并且随着给药时间的延长，AMK的耳毒性效应亦逐渐增强，呈现明显的时效关系。此外，本实验还观察到，虽然AMK 3 d组豚鼠ABR阈移与对照组比较无显著性差异，但是耳蜗底回已开始有OHC缺失，表明AMK引起耳蜗形态方面的损伤要早于听功能的改变，同时也进一步证实了AmAn可在内耳蓄积，而最后的听力损伤是这种蓄积的结果[7]125-131。

　　目前认为，AmAn可以与金属铁形成AmAn-铁复合物，其具有氧化还原活性，可催化体内自由基的大量产生。过多的自由基将打破其在体内的平衡，通过激活调节细胞死亡的信号转导途径及其相关基因，使构成生物膜的脂质或蛋白质、核酸等生命大分子发生过氧化，从而引起耳蜗毛细胞损伤及死亡，最终导致听力丧失。为此，人们尝试应用依布硒啉、甲磺酸去铁胺(deferoxamine mesylate，DFO)等抗氧化剂来防护AMK的耳毒性并取得了较好效果[4]213-217,[8]157-161，表明AMK的耳毒性亦与其促进自由基的过量生成有关。至于AMK的耳毒性损伤中，自由基通过激活哪些信号转导途径继而引起耳蜗毛细胞的死亡，尚需进一步深入研究。

【参考文献】