急性白血病MTS1/P16基因缺失的研究

作者:黄毓　甘宝文　周建生　薜小霞　周吉成

关键词： 急性白血病 MTS1/P16基因

　　急性白血病是我国常见的造血系统恶性疾病。其病因及发病机理目前还不完全清楚，病毒、遗传因素及染色体异常与它的发生都有关系。现已证实，MTS1/P16基因在人类多种恶性肿瘤中存在着不同形式的改变［1,2］，但有关MTS1/P16基因在急性白血病中的研究国内报道少［3］。我们采用差别 PCR技术对MTS1/P16基因在急性白血病中纯合缺失进行检测，以了解MTS1/P16基因缺失与急性白血病的关系。

　　1　材料与方法

　　1.1　标本来源　30例急性淋巴细胞白血病(ALL)，男19例，女11例，年龄2～70岁，中位年龄19岁。43例急性非淋巴细胞性白血病(ANLL)，男24例，女19例，年龄2.5～73岁，中位年龄34岁。对照组15例，为非恶性血液病病人(缺铁性贫血7例，血小板减少性紫癜8例)，均为我院住院病人，诊断标准均符合FAB法，治疗前抽骨髓1～2 ml，以用于DNA提取。

　　1.2　DNA提取　参照《分子克隆实验指南》［4］提取高分子量DNA，用TE(pH8.0)溶解，紫外分光光度测其 OD值，调整浓度至 50 ng/ml，以备PCR扩增。

　　1.3　引物设计　根据已知MTS1/P16基因序列，在第2外显子的两侧设计1对扩增引物，PCR扩增物为480 bp，引物序列如下：PS1:5′ - GGAAATTGGAAACTGGAAGC-3′;PS2:5′ - TCTGACCTTTGGAAGCTCT-3′。选用DMD Exon51引物做内对照，其PCR扩增产物为388 bp，引物序列如下：PS1:5′ - GAAATTGGCTCTTTAGCTTGTGTTTC-3′；PS2:5′ - GGAGAGTAAAGTGATTGGTGGAAAATC-3′。上述引物均由中国科学院上海生化所合成。

　　1.4　PCR扩增　PCR反应混合液含10×PCR Buffer,200 μmol/L dNTP，1 μmol/L primer, 200 ng模板DNA， Taq DNA 2.5 U加 H2O至终体积 50 μl，在DNA扩增仪上进行如下循环：95℃预变性5.0 min ，95℃，1.0 min；58℃，1.0 min；72℃，1.5 min；30个循环。取5　μl　 PCR产物在2%琼脂糖凝胶 (加EB　0.5　μg/ml)上电泳分析(Taq DNA聚合酶为美国Life Technologies 产品)。

　　2　结果

　　30例 ALL有10例MTS1/P16Exon2纯合缺失，频率为33.3%(10/30)；43例ANLL中有 6例MTS1/P16 Exon2纯合缺失，频率为14.0%(6/43)，15例对照无MTS1/P16Exon2纯合缺失。

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