苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响论文

                  作者：胡怡秀，刘秀英，马征，胡春生，张莹莹，尹进

【关键词】  苦瓜水 雄性小鼠精子

　　苦瓜作为一种食兼用的草质藤木植物的果实，民间食用已有数百年，其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入，人们发现苦瓜有较多的作用〔1-3〕和广阔的应用前景。对苦瓜的毒性研究发现，苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性〔3〕。国内外学者采用不同方法对苦瓜食用部分进行了分离提取及鉴定，从苦瓜中曾分离出苷类、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类、生物碱类、有机酸、脂类、甾类、萜类、微量元素等多种化学成份〔4〕。由于提取方法不同，导致苦瓜提取物成分各异，不同提取物的生物学作用亦不同。因此，本实验观察了苦瓜提取物对雄性小鼠精子的影响，旨在为更好地开发利用苦瓜系列产品提供科学依据。现报告如下。

　　1 与方法

　　11  材料

　　111 苦瓜水提取物                   

　　由湖南师范大学化学测试分析中心提供。

　　112 实验动物及饲养                   

　　清洁级昆明种小鼠，体重25～35?g(南华大学实验动物学部)；实验动物生产许可证号为SCXX(湘)2004-0009，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。实验期间动物房温度为21～24℃，湿度为56%～58%。

　　12 方法〔５〕                   

　　将25只小鼠随机分为5组，每组5只。试验组设10?000，5?000，2?500?mg/(kg·bw)3个剂量，采用40?mg(kg·bw)剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照，小鼠按20?ml/(kg·bw)体积灌胃，每日1次，连续5?d，于末次灌胃后的第30?d处死动物，取两侧副睾，按文献〔5〕制备精子悬液。

　　121  精子计数〔6〕                   

　　将精子悬液滴入细胞计数池内，用高倍镜计数中央大格内5个中方格的精子数，结果乘以10９即为每升悬液中的精子数。

　　122 精子活动率〔6〕                  

　　于(20±2)℃的室温下，在10?min内完成每只鼠1?000个左右精子活动力的观察，取悬液滴片，显微镜下将精子活动状态分为4级：Ⅰ：运动活泼，直线运动；Ⅱ：运动欠活泼，直线游动；Ⅲ：原地旋转，动作迟缓；Ⅳ：毫无活力，并按下式计算精子活动率： （科教范文网http://fw.ΝsΕΑc.com编辑）
精子活动率(%)=Ⅰ+Ⅱ+ⅢⅠ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ×100

　　123 精子存活率采用伊红试验〔7〕。                   

　　取精子悬液和05%伊红水溶液各1滴混合，在1?min内高倍镜检查。活的精子不着色，死的精子染成淡红色或淡黄色，计算存活率。

　　124 精子形态学观察〔5〕                  
 
　　将精子悬液用4层擦镜纸过滤，吸滤液涂片，干燥后甲醇固定5?min，2%伊红染色1?h，用水轻冲、干燥。每只动物计数1?000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。

　　13 分析                   

　　数据进行χ2。

　　2 结果

　　21 苦瓜水提物对小鼠精子计数的影响                   

　　2?500，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组小鼠精子数分别为(7620±2637)，(5640±1511)，(6140±1110)×109/ml，对照组为(7840±4586)×109/ml。单因素方差分析显示，4组精子计数总体比较差异无统计学意义(P＞005)。

　　22  苦瓜水提物对小鼠精子存活率的影响                   
　　2?500，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组小鼠精子生/死比例分别为0934，0794，0863，对照组为1383，χ２检验显示，3个剂量组小鼠精子生/死比例较对照组显著减低(P＜0001)。

　　23 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(表1) 表1 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(略)

　　24 小鼠精子形态学观察(表2) 表2 苦瓜水提取物对小鼠精子畸形发生率的影响(略)                 

　　χ２检验显示，各试验组精子畸形率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞005)，而各试验组和阴性对照组精子畸形率显著低于环磷酰胺组(P＜001)。提示苦瓜水提物对小鼠精子畸形发生率无明显影响。

　　3 讨 论

　　本实验结果表明，(1)苦瓜水提取物对精子的存活率有显著影响，3个剂量组与对照组比较分别下降了975%，1379%，1172%；(2)苦瓜水提取物能提高存活精子的活动度，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组与对照组比较，活动度有明显提高，分别较对照组提高了99%，160%；(3)苦瓜水提取物3个剂量组精子数量虽较对照组均有下降，但差异无统计学意义；(4)未见苦瓜水提取物对小鼠精子形态有明显影响。本实验观察结果与覃国芳等〔8〕、Nasseem MI等〔9〕的报道相似，精子存活率下降，理论上讲可导致生育力下降；也有不同，即存活精子活动度增强，精子计数未见明显下降，畸形数未见明显增加。这可能与苦瓜提取方式、受试对象物种不同有关。由于苦瓜水提取物成分目前还不是十分清楚，导致精子存活率下降、存活精子活动度增加的作用机制，有待于进一步研究。

【参考文献】
  　　〔1〕袁涌，贺吉川，李妍.苦瓜的作用之浅谈［J］.中华临床，2004，5(11)：108-109.

　　〔2〕刘霞，李生才，冯长根.苦瓜的研究进展［J］.材，2002，25(3)：211-213. （科教作文网http://zw.ΝsΕAc.com发布）

　　〔3〕陈红琳.苦瓜的药理研究概况［J］.中华杂志，2002，9(18)：1504-1505.

　　〔4〕刘宝山，庞宗然，刘晓刚，等.苦瓜及其复方制剂降糖作用的研究进展［J］.河北医学，2002，8(2)184-187.

　　〔5〕食品安全性毒评价程序和方法［Ｓ］.GB15193-2003.57.

　　〔6〕李涤生.临床检验基础［M］.北京：人民卫生出版社，1991：283.

　　〔7〕叶应妩，李健斋，王玉琛.临床实验诊断学(下)［M］.北京：人民卫生出版社，1991：1543.

　　〔8〕覃国芳，李远慧，张振强，等.苦瓜果对雄性大鼠生育力的影响［J］.贵阳医学院学报，1995，20(1)：14.

　　〔9〕Naseem MI,Patil SR.Antispermatogenic and androgenic activities of Momordica(karela)in albino rats［J］.J Ethnopharmacol,1998,61(1):9-