奥洛他定在健康人体的药动学研究论文(2)

　　盐酸奥洛他定片(北京嘉林药业股份有限公司，5 mg/片,批号：20080901，失效期2010年8月);盐酸奥洛他定对照品(北京嘉林药业股份有限公司，批号：080801，质量分数99.8%);内标物阿米替林对照品(批号：100518-200401，中国药品生物制品检定所);乙腈(色谱纯，默克公司);甲酸铵(质谱纯，美国Sigma公司);水为重蒸去离子水;甲酸(色谱级，美国迪马公司);醋酸乙酯、二氯甲烷(分析纯，均由广州化学试剂厂提供)。

　　1.2仪器

　　Agilent 1100高效液相色谱仪系统(G1313A自动进样器，G1311A自动调配泵G1316A可调柱温恒温箱，Agilent LC/MSD Trap XCT质谱仪，Agilent色谱化学工作站)，XW-80A旋涡混合器(原上海医科大学仪器厂)，BP110S型电子分析天平(瑞士Sartorius)，MIKR012-24型高速离心机(美国Micro12-24)，111型真空干燥箱(德国MMM-Group)。

　　1.3受试者选择

　　试验前试验方案经医院伦理委员会审批，志愿者本人签署知情同意书后，进行体格检查，胸透、心电图、血压、血尿常规及肝肾功能等各项指标均正常者入选为受试者。受试者10人，男女各半，平均年龄为(22±3)岁，受试者禁食过夜(至少10 h)，于次日早晨7：30，200 mL温开水送服盐酸奥洛他定片5 mg，给药后2 h内不得饮水，4 h后进食统一低蛋白、低脂肪标准餐，试验期间不做剧烈运动。

　　1.5血样采集与ADR监护

　　10例受试者均于用药前在前臂静脉安置留置针抽血，用药前采空白血约4 mL，再分别于给药后0.25、0.5、0.75，1、1.5，2、3、4、6、8、10、12、16、24、48 h采集肘静脉血5.0 mL， 置肝素化的试管中，3 000 r/min离心10 min分离血浆，置-20 ℃下冰柜储存备用。整个试验过程均在医师和护士监护下进行，并于给药后不同时间监测受试者的反应，及时处理和记录试验过程中发生的不良反应。试验期间禁用其他药物及含咖啡因类饮料、烟和酒。

　　1.6样品测定

　　1.6.1色谱条件色谱柱：Agilent Eclipse plus C18(4.6 mm×150 mm，3.5 μm);流动相：甲醇-水(含0.005 mol·L-1甲酸铵和质量分数0.1%甲酸)(体积比95∶5);流速：0.5 mL·min-1;柱温：40 ℃。质谱条件：电喷雾电离源(ESI)，正离子化，扫描方式为选择性离子监测，奥洛他定m/z 338.3→165.2，阿米替林m/z 278.1→91.0，毛细管电压4 000 V，喷雾气压力50 Pa，干燥气流速10 L·min-1，干燥气温度350 ℃，奥洛他定和阿米替林碰撞能量均为28 U，裂解电压均为135 V，四级杆捕捉时间均为0.2 s，电子倍增器电压200 V，进样量为20 μL。

　　1.6.2血样的处理取含药血浆0.5 mL置2 mL的带塞离心管中，加入200 μg·L-1的阿米替林甲醇溶液50 μL，快速振荡5 s，加乙腈(含质量分数1%甲酸)0.5 mL，密塞，振荡15 s， 16 000 r·min-1离心5 min，吸取上清液转移至10 mL带塞磨口锥形玻璃离心管，加醋酸乙酯-二氯甲烷(体积比4∶1)混合液 3 mL，密塞，旋涡振荡1 min，3 000 r·min-1 离心5 min，吸取有机层置3 mL的带塞磨口锥形玻璃离心管内，