奥洛他定在健康人体的药动学研究论文(3)

　　1.6.3标准溶液的配制精确称取盐酸奥洛他定、盐酸阿米替林对照品各若干(分别含奥洛他定、阿米替林各10 mg)，分别置10 mL容量瓶中，用甲醇溶解定容至刻度，即配制成质量浓度为1 g·L-1的贮备液，贮存于4 ℃冰箱避光保存备用。试验前按试验所需用流动相稀释成相应浓度的标准工作液。另配制质量浓度为200 μg·L-1的内标阿米替林甲醇溶液。

　　1.6.4方法专属性分别取6名受试者的空白血浆各0.5 mL，在“1.6.1”色谱条件下测得的6种来源空白血浆、含药血浆及受试者给药后血样的HPLC-MS色谱图分别见图1。奥洛他定、阿米替林的出峰时间分别约为2.99 min和3.15 min。结果表明，空白血浆中内源性物质不干扰奥洛他定及内标阿米替林的测定。

　　1.6.5标准曲线制备取空白血浆1 mL，分别加入质量浓度为2、5、10、50、100、200、500和1 000 μg·L-1的奥洛他定对照品溶液50 μL，振荡5 s，使血浆药物质量浓度分别相当于0.2、0.5、1、5、10、20、50和100 μg·L-1，然后按“1.6.2”项处理。在“161”项下色谱条件进行HPLC-MS分析，以奥洛他定峰面积与内标峰面积之比(y)为纵坐标，以血浆奥洛他定质量浓度(x)为横坐标， 权重系数为1/x2，血浆中奥洛他定质量浓度在0.2～100 μg·L-1范围呈良好的线性关系，典型方程为：y=0.3038x+00032，r=0.995 6(n=8)。血浆样品奥洛他定定量下限质量浓度为0.2 μg·L-1(S/N>10)，平行对质量浓度为0.2 μg·L-1的5个含药血浆样品处理后进行色谱分析，RSD为6.36%。

　　1.6.6精密度和回收率按“1.6.5”项方法分别配制低(0.5 μg·L-1)、中(20 μg·L-1)和高(50 μg·L-1)质量浓度的奥洛他定血浆溶液各15份，分为3批，每批5份，并于每批的标准曲线同时进行，依“1.6.2”项处理后取20 μL进样，计算质控样品的测得浓度，与配制浓度对照，求得本法的准确度和精密度。同法以空白血浆，除不加标准系列溶液和内标外，按“1.6.5”项方法处理后，再加入相应浓度的奥洛他定和阿米替林，残留物以流动相200 μL溶解，离心后取20 μL进样，以每一浓度两种处理方法的峰面积比值计算提取回收率。结果见表1。日内精密度测得值/(μg·L-1)RSD/

　　1.6.7稳定性试验按“1.6.5”方法分别配制低(0.5 μg·L-1)、中(20 μg·L-1)、高(50 μg·L-1)的质控血浆样品，每个浓度18个样品分析，分成3组，分别在25 ℃(0 h、24 h)、-20 ℃冻融(冻融1次、3次)和长期-20 ℃冻存(1 d、60 d)下进行质谱测定，结果RSD均在15%(低质量浓度RSD在20%)内。

　　1.7质量控制

　　每批样品检测前均先制作随行标准曲线，测定样品时，随行检测低(0.5 μg·L-1)、中(20 μg·L-1)、高(50 μg·L-1)质量浓度的质控样本(制备方法同“16.5”)。结果随行标准曲线线性良好，低、中、高3个浓度质控样品的偏差均在15%内，符合体内药物分析要求，本试验血浆样品的测定结果准确、可靠。

　　1.8数据处理